Transferencia de genes a organoides intestinales de ratón mediante vectores lentivirales
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:30 min. • August 31st, 2026
Comience con organoides intestinales de ratón que han sido parcialmente disociados para facilitar la transducción lentiviral.
Tomar los vectores lentivirales en un medio de transducción.
El lentivirus porta un gen de interés para la integración estable en el genoma del huésped.
Agregue el lentivirus al pocillo.
Incube la mezcla para permitir la entrada viral.
El ARN viral se transcribe inversamente en ADN e integra en el genoma del huésped.
Añada medio de organoides y transfiera la mezcla a un tubo.
Centrifugar para eliminar cualquier virus no unido.
Mezcle el precipitado en una matriz de membrana basal.
Coloque los organoides en un pocillo y permita que se solidifiquen.
La matriz forma una red que atrapa a los organoides y proporciona soporte estructural.
Añada medio de organoides suplementado con promotores del crecimiento para favorecer la proliferación de los organoides.
Esto da como resultado organoides brotantes que contienen el gen transducido, los cuales pueden utilizarse para análisis funcionales posteriores.
Transfiera los organoides en esta última pequeña cantidad de medio a un pocillo de una placa de 48 pocillos.
Añada el lentivirus de alta titulación previamente preparado en medio d
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