Imágenes de fluorescencia multiplexadas de ácidos nucleicos virales y proteínas en linfocitos humanos infectados

Comience con linfocitos humanos infectados con VIH-1 sobre un cubreobjetos montado en una portaobjetos.

Estas células han sido hibridadas con sondas que marcan fluorescentemente el ARN viral y el ADN proviral.

Incube las células en una solución bloqueadora para prevenir la unión no específica de anticuerpos.

Introduzca anticuerpos primarios dirigidos contra la proteína de la cápside del VIH-1.

Incube para permitir que los anticuerpos primarios se unan a la proteína de la cápside.

Lave las células con tampón para eliminar los anticuerpos no unidos.

Añada anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia que se unen a los anticuerpos primarios.

Lave los anticuerpos no unidos.

Añada un colorante específico para ADN para teñir los núcleos de las células, luego lave para eliminar el exceso de colorante.

Utilice imágenes de fluorescencia multiplexadas para detectar simultáneamente ADN viral, ARN, proteína y núcleos del huésped en colores distintos.

Esta visualización a nivel de célula individual permite el estudio de diferentes etapas del ciclo vital del virus mediante la visualización simultánea del ADN, ARN y proteínas virales en células infectadas.

Para la inmunomarcación de las proteínas de in