Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:36 min. • August 31st, 2026
Comience con una suspensión que contenga precipitados de intasomas del virus espumoso prototípico o PFV, integrasas monoméricas, oligómeros de ADN y agregados proteicos.
Los intasomas de PFV son tetrámeros de integrasas virales complejados con oligómeros sintéticos que imitan el ADN genómico viral.
Agregue una solución salina a la suspensión e incube en hielo. La sal reduce la interacción electrostática entre los intasomas, lo que permite la solubilización de los precipitados.
Pipetee suavemente a intervalos regulares para favorecer la solubilización del intasoma.
Centrifugar para pelotar el precipitado restante y recoger el sobrenadante que contiene los intasomas solubles.
Tome una columna de cromatografía de exclusión por tamaño pre-equilibrada, empaquetada con perlas de agarosa reticulada, y cargue el sobrenadante sobre la columna.
Debido a su gran tamaño, los agregados proteicos y los intasomas evitan los poros de las perlas y eluyen antes.
Las integrasas monoméricas más pequeñas y los oligómeros entran en los poros de las perlas y eluyen más tarde.
Recolecte las fracciones eluidas tempranamente que contienen intasomas para su posterior análisis descendente.
Prepare dos puntas de pipeta
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