Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:23 min. • August 31st, 2026
Comience con una solución estándar de ARN viral sintetizado y diluido seriamente en medio de cultivo.
Estas diluciones sirven como estándares de referencia para cuantificar el ARN viral en las muestras.
Ahora, tome el sobrenadante que contiene el virus a partir del cultivo celular infectado con el virus.
Este medio de cultivo contiene un inhibidor que se une a las enzimas que degradan el ARN y previene la degradación del ARN viral.
Agregue el tampón de procesamiento que contiene la enzima proteinasa K.
Centrifugar brevemente la solución para mezclar uniformemente.
Coloque la placa de PCR que contiene las muestras en el termociclador.
Primero, incubar a una temperatura moderada para activar la proteinasa K.
Esta enzima digiere las proteínas virales que encapsulan el genoma, liberando el ARN viral en la solución.
A continuación, incubar a una temperatura más alta para inactivar la enzima y desnaturalizar el ARN.
Finalmente, almacene las muestras procesadas bajo condiciones frías hasta el análisis de PCR cuantitativa en tiempo real.
Primero, mezcle 199 microlitros de tampón de procesamiento con un microlitro de proteinasa K libre de nucleasas. Usando medio de cultivo celular, diluya seriamente e
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