Recolección de partículas del virus de la hepatitis E a partir de células de cáncer hepático humano

Comience con un cultivo de células de cáncer hepático humano transfectadas con ARN del virus de la hepatitis E (HEV) para producir partículas virales.

Algunos VHE adquieren una membrana endosomal de origen hospedador y salen de la célula, mientras que otros permanecen dentro de la célula como VHE no revestidos.

Para cosechar los HEV extracelulares, recolecte y filtre el sobrenadante del cultivo para eliminar los restos celulares.

Guarde a una temperatura ultra baja para preservar la infectividad.

Para cosechar los HEV intracelulares, lave las células con un tampón.

Añada tripsina-EDTA para desprender las células, luego agregue medio para detener la actividad enzimática.

Transfiera la suspensión a un tubo y centrifugue.

Deseche el sobrenadante que contiene trypsin residual. Reuspenda el precipitado y transfiéralo a un tubo.

Congele las células en nitrógeno líquido y désuelas sobre hielo.

Repita los ciclos de congelación-descongelación para lisar las células y liberar los virus.

Centrifugar, recolectar el sobrenadante que contiene los virus y almacenar a una temperatura ultra baja.

En el día seis, filtre el sobrenadante a través de una malla de 0,45 micrómetros para eliminar cualquier resto cel