Reprogramación de células sanguíneas humanas en células madre pluripotentes inducidas mediante el virus Sendai

Tome un cultivo de células mononucleares de sangre periférica humana (PBMCs).

Agregue el virus Sendai que codifica los factores de transcripción de reprogramación. Cubra y selle la placa.

Centrifugar para mejorar el contacto entre el virus y la célula e incubar.

Tras la fusión del virus, el ARN viral expresa factores de transcripción que activan los genes de pluripotencia celular y reprimen los genes específicos de linaje para iniciar la reprogramación.

Durante este proceso, un subconjunto de PBMC transducidos se convierte en células madre pluripotentes inducidas (iPSC) y expresa proteínas de adhesión.

Trasládelos a un pocillo recubierto con matriz y centrifugue las células. Reemplace el sobrenadante con un medio de crecimiento.

Tras la incubación, las iPSC se adhieren a la matriz, mientras que los PBMC transducidos no adherentes permanecen en suspensión.

Transfiera la suspensión a un pocillo recubierto y centrifugue. Añada el medio al pocillo original e incube ambos.

Los PBMC transducidos restantes inician la reprogramación, se convierten en iPSC y se adhieren. Este paso maximiza la retención de células reprogramadas.

Sustituya el medio diariamente para mantener el crecimiento de las iPSC.