Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:48 min. • August 31st, 2026
Tome un cultivo de células mamíferas en fase estacionaria con replicación mínima de ADN y recoja el medio acondicionado.
Añada el virus del herpes simple (VHS) e incube con agitación ocasional para permitir la fijación viral. Lave para eliminar el virus no unido y restablezca el medio acondicionado.
Tras la incubación, el virus se fusiona con la membrana del huésped, liberando el nucleocápside en el citoplasma.
El ADN bicatenario viral entra al núcleo, se circulariza y expresa proteínas virales para la replicación del ADN viral.
Las proteínas virales y del huésped desenrollan el ADN viral y sintetizan un cebador de ARN. A continuación, el complejo de la polimerasa del ADN viral se une y alarga el cebador para la síntesis de ADN.
A medida que avanza la replicación, agregue un análogo de nucleósido al cultivo. Este entra en las células y se convierte en forma de trifosfato.
Dado que la replicación del ADN del huésped es mínima, el análogo se incorpora preferentemente al ADN viral en replicación, marcando así los genomas virales.
Los genomas virales marcados están listos para el análisis proteómico posterior de las proteínas asociadas.
Comience este procedimiento con el cultivo de células MRC
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