Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 5:13 min. • August 31st, 2026
Tome los núcleos celulares que contienen genomas virales marcados con nucleótidos modificados con alquino.
Suspenda los núcleos en una mezcla de azida de biotina e iones de cobre, e incube.
El ion cobre facilita la unión covalente del grupo azida y el grupo alquino.
Centrifugar y desechar el sobrenadante.
ReSuspender en tampón, transferir y centrifugar para obtener el precipitado.
Congele rápidamente, luego descongele el precipitado para facilitar la lisis.
Re-suspender y sonicar para lisar los núcleos.
Centrifugue y recoja el sobrenadante que contiene complejos de proteína-ADN viral.
Filtre el sobrenadante para eliminar contaminantes.
Diluya el filtrado.
Agregue perlas magnéticas recubiertas con estreptavidina e incube para facilitar la unión con los complejos proteína-ADN biotinilados.
Aplique un campo magnético para recolectar las perlas y lávelas para eliminar los contaminantes.
Repita el lavado.
Agregue un tampón de elución y caliente para separar y desnaturalizar las proteínas.
Separar las perlas, recolectar el eluato.
Congele rápidamente las proteínas aisladas. Almacénelas a temperaturas ultra bajas para análisis posteriores.
Después de eliminar completamente el PBS, re-suspenda el sediment
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