Aislamiento de virus endógenos de Drosophila silvestres utilizando líneas celulares permisivas modificadas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 1:32 min. • October 29th, 2026
Comience con un tubo que contenga adultos anestesiados de Drosophila del mismo sexo y especie.
Agregue un tampón y homogenice para liberar poblaciones virales endógenas y bacterias.
Centrifugue el homogenato y luego pase el sobrenadante a través de una membrana mediante centrifugación para eliminar bacterias y restos celulares.
Transfiera el filtrado a una placa de múltiples pocillos que contenga cultivos celulares de Drosophila modificados que sean permisivos para virus de ARN e incube.
Los virus ingresan a la célula huésped mediante endocitosis mediada por receptores.
Una vez dentro, el genoma viral se replica, produciendo ARN bicatenario (dsRNA) intermedios.
Las células hospederas expresan una proteína supresora que se une al ARNdc, evitando su degradación por Dicer, la enzima de defensa del hospedero.
Esto permite la síntesis de ARN viral y la producción de proteínas virales, favoreciendo la replicación y amplificación virales.
Cargas virales elevadas afectan el crecimiento de las células hospederas y producen efectos citopáticos.
Centrifugar brevemente la placa.
Recolecte el sobrenadante que contiene las poblaciones virales y almacénelo a una temperatura baja para su análisis posterior.
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