Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 4:35 min. • August 31st, 2026
Comience con células de mamífero infectadas con un adenovirus.
Realice ciclos repetidos de congelación y descongelación para lisar las células y liberar los viriones.
Centrifugar el lisado para sedimentar los residuos. Recoger el sobrenadante que contiene las partículas virales.
Coloque el sobrenadante viral sobre un gradiente escalonado de cloruro de cesio para la separación basada en densidad.
Ultracentrifugar para permitir que las partículas virales migren de acuerdo con sus densidades de flotación.
Los viriones intactos que contienen el genoma adenoviral completo son más densos debido al ADN empaquetado y se sedimentan en una banda inferior, mientras que las cápsidas vacías más ligeras y los restos permanecen en las capas superiores.
Retire las capas superiores. Recopile la banda inferior de viriones que contienen el genoma.
Re-suspender los viriones en cloruro de cesio de densidad uniforme y ultracentrifugar nuevamente para refinar la separación y concentrar las partículas completas.
Deseche las capas superiores y recupere la banda inferior.
Dialice la muestra para eliminar el cloruro de cesio.
Los vectores adenovirales de alta pureza que contienen el genoma ya están listos para aplicac
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