Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:08 min. • August 31st, 2026
Comience con un sistema de biorreactor que contenga un andamio de hígado de rata descelularizado repoblado con células hepáticas humanas.
El andamio se mantiene en un sistema de flujo que circula medios para suministrar nutrientes.
Cargue una jeringa con un tampón que contenga un vector recombinante de virus adeno-asociado.
El vector lleva ADN auto-complementario con un casete de transgén que codifica un reportero fluorescente y un ARN de silenciamiento génico.
Detenga el flujo de medio y desconecte el tubo de entrada.
Inyecte el vector a través del vaso sanguíneo principal que abastece el andamio.
Incubar para permitir la interacción entre el vector y la célula.
El vector entra en las células hepáticas mediante endocitosis mediada por receptores.
Una vez dentro, el vector escapa del endosoma y libera su ADN auto-complementario en el núcleo.
El ADN auto-complementario permite la expresión directa del transgén, produciendo una proteína fluorescente y un ARN de silenciamiento génico.
Reanudar gradualmente el flujo del medio para restablecer la circulación a través del andamio.
El modelo de hígado transducido ya es adecuado para el análisis posterior.
Ahora, transduzca el modelo de hígado. Primero, agregue 27 billones de vectores en cinco mililitros de PBS en una jeringa. Se puede añadir rojo de fenol a 5 microgramos por mililitro.
Luego desconecte el hígado del circuito de medio e inyecte los vectores en el sistema. Una vez inyectados, incube el sistema durante una hora sin bombeo. A continuación, aumente gradualmente el flujo como se describió anteriormente.
Posteriormente, mientras el hígado transducido se incuba durante seis días, cambie 50 mililitros del medio cada dos días.