Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:33 min. • August 31st, 2026
Tome una cultura de células humanas.
Añada lentivirus que codifican un shRNA dirigido al ARNm del huésped bajo un promotor sensible a la tetraciclina fusionado a un operador, de manera condicional.
El lentivirus también lleva genes para un represor de tetraciclina y una proteína de resistencia a antibióticos, colocados bajo un promotor constitutivo.
Incubar para permitir la entrega de ARN viral a las células huésped.
El ARN se convierte en ADNc e integra en el genoma del huésped.
Lave, agregue medio e incube para permitir la expresión del represor de tetraciclina y la proteína de resistencia al antibiótico, generando células transducidas. El represor de tetraciclina se une al operador y suprime la expresión de ARNih.
Lave, agregue medio suplementado con antibiótico e incube.
Las células transducidas expresan la proteína de resistencia al antibiótico, lo que permite su supervivencia selectiva en presencia del antibiótico.
Agregue doxiciclina, un análogo de la tetraciclina, al cultivo.
La doxiciclina se une al represor de tetraciclina, impidiendo su unión al operador y permitiendo la expresión del ARNip.
El ARNip se procesa en ARNip, que se incorpora al complejo RISC y degrada el ARNm diana.
Es
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