Purificación de partículas virales recombinantes a partir de células renales humanas transfectadas

Comience con un lisado celular que contenga ADN celular agregado con proteínas celulares y partículas virales.

Agregue iones de magnesio, seguidos de una nucleasa, para activar la degradación enzimática del ADN celular y romper los agregados de ADN-proteína.

Centrifugar para separar los residuos y recoger el sobrenadante que contiene partículas virales.

Coloque el sobrenadante sobre un gradiente discontinuo de iodixanol con concentraciones crecientes de arriba hacia abajo, luego llene el tubo con tampón.

Ultracentrífuga para separar los componentes según su densidad. Las partículas virales se acumulan en la interfase entre las capas de alta y media densidad.

Inserte una aguja en esta interfase y recoja las partículas virales en un tubo.

Añada un tampón que contenga componentes estabilizantes, los cuales previenen la agregación de partículas virales.

Luego transfiera la solución a un tubo con un filtro de membrana.

Centrifugue para concentrar las partículas virales por encima del filtro.

Agregue el tampón suplementado con el agente estabilizante y centrifugue nuevamente para obtener partículas virales purificadas.

Para recolectar las células transfectadas, desprenda y suspenda las células uti