Inmortalización de células endoteliales mediante la transducción retroviral de oncogenes virales
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:07 min. • August 31st, 2026
Tome un medio que contenga partículas retrovirales que codifiquen oncogenes virales y un gen de resistencia a antibióticos.
Centrifugue el medio para eliminar los restos celulares.
Recolecte el sobrenadante que contiene las partículas virales y colóquelo sobre un cultivo de células endoteliales.
Incubar para permitir la entrada viral.
El ARN viral se transcribe inversamente en ADN, el cual se integra en el genoma del huésped.
El gen de resistencia a antibióticos produce una proteína de resistencia. Los oncogenes producen proteínas que se unen a proteínas supresoras de tumores que controlan la división celular e inactivan dichas proteínas, extendiendo así la longevidad celular.
Sustituya el medio por un medio fresco.
Incubar nuevamente para asegurar la integración estable del ADN viral.
Retire el medio y lave las células.
Agregue una solución enzimática de disociación para desprender las células.
Transfiera la suspensión celular, centrifugue y elimine el sobrenadante.
Re-suspenda el precipitado y transfiéralo a un matraz.
Agregue un antibiótico al medio.
Solo sobreviven las células que expresan la proteína de resistencia al antibiótico, seleccionando así las células inmortalizadas por las proteí
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