Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:35 min. • August 31st, 2026
Comience con un lisado celular filtrado que contenga vectores de virus adeno-asociado (AAV) y contaminantes derivados del hospedador.
Pase el lisado a través de una columna de afinidad basada en heparina.
Las proteínas de la cápside viral se unen electrostáticamente a los grupos de heparina con carga negativa.
Lave la columna con un tampón para eliminar los contaminantes no unidos.
Aplique un tampón que contenga detergente para solubilizar los restos membranosos.
Lave nuevamente con el tampón sin detergente.
Introduzca un tampón suplementado con cationes para crear un entorno iónico, luego lave con un tampón de salinidad moderada para liberar impurezas débilmente unidas.
Agregue un tampón de alta salinidad para interrumpir las interacciones entre la cápside y la heparina y eluir las partículas virales.
Recolecte las fracciones de elución enriquecidas en partículas virales intactas y transfiéralas a tubos concentradores centrífugos equipados con membranas de filtro.
Centrifugue los tubos para eliminar el exceso de tampón, luego recoja las fracciones virales concentradas en un tubo.
Lave la membrana con el tampón para recuperar las partículas virales residuales y maximizar el rendimiento.
Deshi
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