Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:45 min. • August 31st, 2026
Comience con una suspensión de células bacterianas que expresan integrasa viral con etiqueta polihistidina.
Sonicar la suspensión para romper las membranas bacterianas y liberar la integrasa.
Transfiera el lisado a un tubo para ultracentrífuga.
Centrifugar a alta velocidad para obtener el sedimento de los restos celulares y recoger el sobrenadante.
A continuación, tome una columna de cromatografía empaquetada con resina cargada con níquel y equilibre la columna con tampón.
Cargue el lisado clarificado en la columna.
Las proteínas con histidinas se unen débilmente al níquel, mientras que la integrasa con etiqueta de polihistidina se une fuertemente.
Lave con tampón para eliminar las proteínas no unidas, luego agregue tampón de elución con una concentración de imidazol creciente linealmente.
La imidazol compite con la histidina por la unión al níquel y libera la integrasa.
Recoja las fracciones y transfiera alícuotas a tubos que contengan tampón de carga.
Caliente para desnaturalizar las proteínas, luego cargue en un gel de poliacrilamida.
Realice electroforesis y analice las bandas proteicas.
Identifique las fracciones que contienen integrasa pura, sin proteínas contaminantes, y combínelas para
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