Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:21 min. • September 30th, 2026
Comience con una fracción purificada de enzima integrasa viral que contenga nuclesa bacteriana residual como contaminante.
Cargue la muestra en una columna de heparina-Sepharosa pre-equilibrada con un tampón de unión de bajo contenido salino.
A medida que la mezcla pasa a través de la columna, la integrasa se une más fuertemente al ligando de heparina que la nucleasa contaminante.
A continuación, aumente gradualmente la concentración de sal en el tampón que fluye a través de la columna.
En bajas concentraciones de sal, las nucleasas débilmente unidas se eluyen primero, mientras que la integrasa fuertemente unida se eluye más tarde a concentraciones más altas de sal.
Recopile las fracciones eluidas individualmente para separar la nuclease contaminante de la integrasa.
Añada tampón de muestra para SDS-PAGE a cada fracción y caliente para desnaturalizar las proteínas. Cargue las muestras en un gel de SDS-PAGE y realice la separación electroforética.
Observe el gel teñido.
Identifique las fracciones que contengan una banda prominente de integrasa sin proteínas contaminantes visibles, lo que indica una pureza aparente.
Para realizar la fraccionamiento por cromatografía de afinidad con heparina d
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