Generación de lentivirus recombinantes en células mamíferas

Comience con un cultivo de células de mamífero en un medio con bajo contenido de suero.

Agregue el complejo de ADN-lípido a las células.

El complejo contiene plásmidos de empaquetamiento lentiviral y un plásmido de expresión que codifica el gen de interés.

Incube para permitir la entrada celular del complejo.

Sustituya el medio para eliminar el reactivo de transfección residual e incube.

Dentro de la célula, los ADN plasmídicos ingresan al núcleo y dirigen la síntesis de ARN viral que porta el gen de interés y componentes virales, incluyendo proteínas de cápside y de envoltura, transcriptasa inversa e integrasa.

Estos componentes se ensamblan en partículas lentivirales recombinantes que brotan de la membrana del huésped.

Recolecte el medio que contiene las partículas virales liberadas.

Centrifugue para obtener un precipitado de los restos celulares y filtre el sobrenadante viral para eliminar contaminantes residuales.

Centrifugar a alta velocidad para obtener un precipitado de partículas virales íntegras.

Deseche el sobrenadante y resuspenda el pellet viral en un pequeño volumen de medio fresco.

Almacene el lentivirus recombinante concentrado a baja temperatura para aplicaciones posteriores.

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