Aislamiento de un único virus gigante a partir de una población viral mixta utilizando amebas

Comience con amebas cultivadas en un medio de inanición que contiene agentes antimicrobianos para prevenir la contaminación. Las amebas sirven como huéspedes susceptibles para los virus gigantes.

Añada una suspensión viral diluida que contenga una población mixta de dos virus gigantes.

Coloque la placa de cultivo en una bolsa para prevenir la evaporación del medio e incube.

La dilución viral aumenta la probabilidad de que cada ameba encuentre un solo tipo de virus gigante.

Las amebas ingieren los virus, que se replican intracelularmente, provocando que las células infectadas se redondeen y se desprendan, produciendo efectos citopáticos.

Monitoree la cultura bajo un microscopio óptico para confirmar signos citopáticos.

Luego, transfiera el recipiente al portaobjetos de un microscopio invertido.

Coloque una micropipeta en un micromanipulador bajo el microscopio invertido. La micropipeta contiene aceite mineral biocompatible para la aspiración controlada de células.

Utilizando la micropipeta, aspire suavemente una sola célula redonda infectada y libérela en un cultivo fresco de amebas. Incube.

La progenie viral acumulada dentro de la célula infectada se libera por exocitosis y se disemina para