Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:37 min. • September 30th, 2026
Comience con un sobrenadante de cultivo celular de mamífero que contenga el virus de la hepatitis C.
Diluya en forma seriada la suspensión viral en medio de crecimiento.
Inocule cada dilución en una monocapa de células de hepatoma e incube.
El virus entra en las células, libera su genoma y expresa proteínas virales, incluyendo la proteína de replicación no estructural.
Esto produce nuevas partículas virales que brotan e infectan células vecinas, formando un foco de células infectadas.
Después de la incubación, retire el medio y agregue un fijador. Incube a temperatura fría para fijar las células y permeabilizar la membrana.
Lave y agregue un tampón de bloqueo para evitar la unión inespecífica de anticuerpos.
Introduzca anticuerpos primarios que se unan a la proteína de replicación no estructural.
Lave para eliminar los anticuerpos no unidos.
Luego, introduzca anticuerpos secundarios conjugados con fluorocromo que se unan a los anticuerpos primarios.
Lave nuevamente para eliminar los anticuerpos no unidos. Añada un colorante de unión al ADN para teñir los núcleos.
Visualice mediante microscopía de fluorescencia y cuantifique los focos fluorescentes para determinar la concentración del virus en
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