Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 4:29 min. • September 30th, 2026
Comience con laminillas que contienen células de mamífero previamente tratadas con un análogo de uridina, donde un grupo está infectado con el virus y el otro no está infectado.
En células infectadas por virus, las proteínas virales se unen a la maquinaria de transcripción del huésped e inhiben la producción de ARN del huésped, mientras que en células no infectadas, la síntesis de ARN continúa sin interrupciones.
Lave con un tampón. Añada paraformaldehído para fijar las células y luego lave. Añada un detergente para permeabilizar las membranas celulares y luego lave.
Transfiera las laminillas a una cámara húmeda.
Añada la solución de tinción click que contiene azida fluorescente, un catalizador y un agente reductor, luego incube en la oscuridad.
El agente reductor activa el catalizador, lo que permite que el azida fluorescente se una al ARN en formación marcado con uridina.
Lave las laminillas en tampón, sumérjalas en agua y elimine la humedad excesiva.
Monte las laminillas sobre un portaobjetos utilizando un medio de montaje antifade y deje secar al aire.
Bajo un microscopio de fluorescencia invertido, la intensidad reducida de la señal en células infectadas en comparación con células no
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