Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:36 min. • September 30th, 2026
Comience con un cultivo de células epiteliales renales humanas crecidas en un medio rico en nutrientes.
Sustituya el medio por un medio con suero reducido para minimizar la interferencia del suero y mejorar la eficiencia de transfección.
Añada la mezcla de transfección gota a gota a las células.
La mezcla contiene un constructo de ADN retroviral que lleva el gen de interés, un plásmido de empaquetamiento que suministra proteínas virales esenciales y polietilenimina, que forma complejos con el ADN plasmídico para facilitar la transfección.
Incube las células para permitir la absorción del complejo de ADN.
Sustituya el medio para eliminar los reactivos residuales de transfección.
Dentro de la célula, el ADN plasmídico entra al núcleo, donde dirige la producción de proteínas virales y ARN viral que porta el gen de interés.
Estos componentes se ensamblan y brotan hacia el medio como partículas retrovirales recombinantes.
Recolecte el medio que contiene el virus y almacénelo brevemente a baja temperatura para mantener la estabilidad viral.
Centrifugar para obtener el sedimento de los restos celulares.
Aliquote el sobrenadante viral, congele rápidamente en nitrógeno líquido y almacene a baja tempe
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