Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:35 min. • September 30th, 2026
Tome sobrenadantes de cultivo que contengan viriones progenie liberados de células hospederas infectadas con una variante de VIH-1 de prueba o con un control de tipo silvestre.
El virus de prueba lleva una variante génica que altera la eficiencia de replicación y afecta la producción de viriones progenie.
Agregue los sobrenadantes a una mezcla de transcripción inversa que contiene un nucleótido radiomarcado, un nucleótido no marcado, una plantilla de ARN, un cebador, cofactores, detergente y estabilizadores.
Incubar para permitir la formación del complejo molde-primer mientras el detergente lisa los viriones, liberando la transcriptasa inversa, o RT.
La transcriptasa inversa sintetiza ADN a partir del complejo molde-primer, incorporando el nucleótido radiomarcado.
Transfiera las muestras a una membrana de unión al ácido nucleico y seque al aire para inmovilizar el ADN marcado radiactivamente.
Lave repetidamente con tampón y etanol bajo agitación para eliminar los componentes no unidos.
Deje secar al aire y envuelva la membrana. Expóngala a una pantalla sensible a la radiación y detecte las señales utilizando un fosforimager.
Una señal reducida en la prueba indica niveles más bajos de RT, l
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