Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:53 min. • September 30th, 2026
Comience con células epiteliales infectadas con el virus vaccinia y transfectadas con un vector plásmido de recombinación.
El vector lleva un gen diana marcado con fluorescencia verde y un gen de selección metabólica marcado con fluorescencia roja bajo un promotor viral.
Durante la replicación del ADN viral, el casete del plásmido se inserta en el genoma viral.
Recoger las células en medio sin suero.
Utilice ciclos de congelación-descongelación para lisar las células y liberar los virus.
Prepare diluciones seriadas del lisado.
Infecte células epiteliales frescas con el lisado diluido para obtener placas individuales separadas.
Añada medio que contenga suero para la supervivencia celular y un reactivo de selección metabólica, luego incube.
El reactivo de selección inhibe enzimas implicadas en la síntesis de nucleótidos. Solo las células infectadas que portan el gen de selección metabólica expresan una enzima alternativa que permite la síntesis de nucleótidos, posibilitando su supervivencia.
Retire el medio y observe al microscopio de fluorescencia.
La presencia de fluorescencia roja y verde en una placa indica una integración exitosa del casete y la expresión del gen diana.
Infecte una monocap
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