Transducción adenoviral combinada con el silenciamiento génico mediado por siRNA en células cancerosas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:55 min. • September 30th, 2026
Tome una cultura de células cancerosas humanas que expresan una proteína diana endógena y retire el medio.
Tome una suspensión de adenovirus recombinante que porta un gen que codifica la proteína diana marcada con un fluoróforo.
Agregue un pequeño volumen de la suspensión viral a las células para asegurar un contacto cercano entre el virus y la superficie celular.
Incube con agitación ocasional para permitir la fijación viral.
Agregue medio adicional a la cultura.
A continuación, introduzca un complejo de siRNA–fosfato de calcio para dirigirse al ARNm de la proteína diana endógena e incube.
El fosfato de calcio mejora la absorción del siARN, y el siARN se carga en el RISC.
El complejo siARN-RISC luego se une y escinde el ARNm diana, inhibiendo la expresión proteica.
Simultáneamente, el adenovirus entra en la célula y libera su ADN, que dirige la expresión de la proteína diana marcada con un fluoróforo.
Esto permite el agotamiento del proteína diana endógena y su reemplazo simultáneo con la proteína marcada con fluoróforo.
Lave las células con tampón y realice imágenes de fluorescencia para analizar la proteína diana.
Etiquete un tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitros para cada condición y
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