Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:27 min. • September 30th, 2026
Comience con suspensiones de partículas similares a virus (VLPs) mutantes purificadas de hojas de tabaco infectadas.
Los VLPs mutantes contienen residuos de cisteína insertados genéticamente en posiciones específicas de la proteína de la cápside viral.
Añada un colorante fluorescente conjugado con maleimida e incube la mezcla en la oscuridad.
El maleimido se une únicamente a los residuos de cisteína expuestos en la superficie de las partículas tipo virus, mientras que las cisteínas enterradas dentro de la estructura proteica permanecen inaccesibles y sin marcar.
Agregue un agente reductor para bloquear cualquier colorante no reaccionado y prevenir la marcación no específica.
Cargue las muestras en columnas de desalinización empaquetadas con una resina porosa, luego centrifugue para purificar los VLP marcados.
Los colorantes y agentes reductores no reaccionados difunden hacia las perlas de resina porosas y se retienen, mientras que las VLP más grandes quedan excluidas de los poros y eluyen primero.
Los VLP marcados fluorescentemente ya pueden analizarse mediante electroforesis en gel.
Las bandas fluorescentes en el gel muestran mutantes marcados con residuos de cisteína expuestos en la supe
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