Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:51 min. • September 30th, 2026
Comience con partículas similares a virus, o VLP, que contienen enlaces disulfuro expuestos en la superficie de la cápside.
Agregue un agente reductor para escindir los enlaces disulfuro, generando grupos tiol libres mientras se preserva la estructura del capsid.
Combine las partículas tipo virus reducidas con un polietilenglicol reactivo hacia tiol, o enlazador PEG, para prevenir la reoxidación de tiol.
El enlazador PEG vuelve a unir cada par de tiolos formando dos enlaces covalentes.
Esta conjugación covalente también forma una estructura fluorescente que aparece de color amarillo brillante bajo iluminación UV.
Gire la mezcla durante un período prolongado para permitir la conjugación completa.
Mediante filtración centrífuga, purifique las partículas tipo virus PEGiladas eliminando las moléculas pequeñas no reaccionadas mientras se retienen los conjugados intactos.
Realice un SDS-PAGE no reductorio para detectar la unión de PEG, indicada por una banda fluorescente de la proteína de capa.
Evalúe la integridad estructural mediante electroforesis en gel de agarosa nativa, donde bandas similares para VLPs PEGilados y no PEGilados confirman la presencia de VLPs intactos.
Este protocolo produce
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