Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:06 min. • September 30th, 2026
Comience con una monocapa de células adherentes permisivas al virus.
Lave las células, luego agregue un agente disociante para desprenderlas.
Centrifugue y deseche el sobrenadante. Lave las células para eliminar el medio residual.
Re-suspender las células en solución salina tamponada y luego transferir las células a una cubeta.
Introduzca ARN transcrito a partir de un clon de ADNc de longitud completa del virus de la encefalitis japonesa (JEV) alojado en un cromosoma artificial bacteriano.
Aplique pulsos eléctricos para permeabilizar transitoriamente la membrana celular, permitiendo la entrada de ARN.
Deje que las células se recuperen, luego transfiéralas a un medio de cultivo.
El ARN introducido imita al ARN viral nativo para producir nuevos viriones.
Diluya las células en forma seriada y siembre sobre monocapas celulares frescas.
Incube para permitir que los viriones infecten las células vecinas.
Cubra con medio de agarosa e incube. El medio forma una capa semisólida, restringiendo la diseminación viral a las células cercanas.
Las células infectadas se lisan y forman placas discretas, lo que confirma el rescate exitoso del VJE infeccioso.
Comience con células BHK-21 cultivadas durante 24 hor
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