Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:36 min. • September 30th, 2026
Comience con un complejo recombinante de nucleoproteína-fosfoproteína libre de ARN que sea específico de un virus.
Incube el complejo con oligonucleótidos de ARN específicos del virus para iniciar el ensamblaje de partículas similares a nucleocápsides.
Durante el ensamblaje, el ARN viral desplaza el fragmento de la proteína fosfoproteína, permitiendo que la nucleoproteína envuelva el ARN y forme partículas similares a nucleocápsides.
Centrifugar la muestra para eliminar cualquier precipitado.
Tome una columna de cromatografía de exclusión por tamaño previamente equilibrada, empacada con una resina porosa, y cargue el sobrenadante sobre ella.
A medida que la muestra fluye a través de la columna, los complejos grandes de nucleocápside se excluyen de los poros y eluyen primero.
Los complejos proteicos de tamaño mediano y las moléculas pequeñas de ARN entran en los poros y eluyen más tarde.
Monitore la absorbancia del eluido para generar un perfil de elución con picos distintos.
El primer pico muestra nucleocápsides ensambladas, seguidas por complejos proteicos más pequeños y ARN libre.
Recolecte la fracción que corresponde al pico de nucleocápside para su validación y análisis posterior.
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