Name: Aislamiento de células de la glándula salival del ratón madre (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-08T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Aprende a aislar células madre de glándulas salivares de ratón mediante digestión enzimática y mecánica. Este protocolo permite cultivar saliesferas con potencial terapéutico para tratar la xerostomía.

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1. Regent Preparación <ol><li> Buffer: 1% (w / v) de albúmina sérica bovina en solución salina equilibrada de Hank </li><li> Reconstituir las enzimas. Enzima hialuronidasa: 40 mg / ml, se disolvieron en el tampón. Colagenasa II: 23 mg / ml, se disolvieron en el tampón. Utilice soluciones recién preparadas enzima fresca para cada aislamiento. Cuando se disuelve, se almacenan a 4 ° C hasta su uso para la digestión. </li><li> 50 mM de cloruro de calcio en agua destilada. Filtro de esterilización a través de un filtro de 0,2 uM tamaño de los poros. </li><li> Ratón glándulas salivales (MSG) del medio de cultivo: DMEM: F12 con penicilina (100 UI / ml), estreptomicina (100 mg / mL), glutamax (2 mM), factor de crecimiento epidérmico-2 (20 ng / ml), factor de crecimiento de fibroblastos la insulina-2 (20 ng / ml), N2 suplemento (1%), (10 mg / mL) y dexametasona (1 M). </li></ol> 2. Tejidos mecánica y digestión enzimática <ol><li> Pesar de las glándulas salivales disecados. </li><li> Picar las glándulas en una pasta homogénea con tijeras de disección estéril curva en una pequeña placa de Petri. </li><li> Recoger tejido picado en 14 ml tubos, con 1 ml de tampón por tejido submandibular 80 mg. Enjuagar los platos petri limpia de tejido utilizando algunos de los buffer. </li><li> Añadir otra 1 mL de tampón por tejido de 80 mg, seguido de 25 solución de la enzima colagenasa l II, 25 l solución de enzima hialuronidasa y 250 l solución de cloruro de calcio por los tejidos de 80 mg. Si se trabaja con grandes cantidades de tejido, los pasos 2,4 a 2,9 se puede realizar en T25 frascos de cultivo de tejidos para mayor comodidad. </li><li> Incubar en un baño de agua agitando a 37 ° C durante 20 minutos. Retire los tubos y triturar con una pipeta de mezcla de enzimas a fondo a través del tejido nuevo. </li><li> Vuelva a colocar en el baño de agua durante 20 minutos. </li><li> Recoge los tejidos por centrifugación a 400 xg, durante 8 minutos. Desechar el sobrenadante. </li><li> Resuspender en tampón de 2 ml por cada 80 mg de tejido, y repetir la enzima y la adición de cloruro de calcio que el anterior. Incubar 20 minutos en baño de agua agitando. Retire los tubos y triturar con una pipeta de mezcla de enzimas a fondo. </li><li> Incubar durante 20 minutos finales en el baño de agua agitando. Recoger las células por centrifugación como anteriormente, desechar el sobrenadante. </li></ol> 3. Pasos para el lavado <ol><li> Resuspender cada 80 mg de tejido en el tampón de 2 ml y una pipeta para lavar los tejidos libres de las enzimas. </li><li> Centrifugar como se ha de recoger. Desechar el sobrenadante. </li><li> Repetir el lavado con 1 ml de tampón por mg de tejido 80. Centrífuga para recoger, desechar el sobrenadante. </li></ol> 4. Filtración <ol><li> Resuspender solución de tejido en el tampón de 1 ml por mg de tejido 80. </li><li> Añadir la solución a 100 micras de tamaño de poro de filtro colocado más de 50 ml tubo Falcon. No aplicar más de 3 ml de solución de tejido picado por columna, como los filtros pueden obstruirse. Permiten que se filtre a través de. Retire el material de filtrado colgando en la parte inferior del filtro con una pipeta, y añadir a filtrado. </li><li> Use una jeringa con aguja de calibre 26 para tomar filtrado de 50 ml tubos y filtros se aplican a 50 micras de tamaño de poro en tubos de 5 ml. Deje que se filtra a través de, la asistencia al aflojar las tapas, si es necesario. </li><li> Tubos de centrifugación como se ha de recoger. Desechar el sobrenadante. </li></ol> 5. Revestimiento y Mediana Empresa <ol><li> Combine todos los pellets en un solo volumen. Contar con contador de células automatizado o hemocitómetro. </li><li> Células de la placa a una densidad de 0,4 x 10 6 células por pocillo de 12 y placa, o 2.67 x 10 6 células por frasco de cultivo de tejidos T25. Añadir un medio de MSG ml a cada pocillo o 6 ml a cada frasco T25. </li><li> Se incuba a 37 ° C. Ámbitos debe ser claramente visible el día 2. </li></ol> 6. Los resultados representativos: Después de dos o tres días en la cultura, pequeños agregados de células (salispheres) será evidente en los cultivos. Salispheres seguirá creciendo en tamaño durante un período de diez días en la cultura. Representante fase imágenes de microscopía de contraste de salispheres se muestra en la Figura 1. Proliferación de las células que expresan las células madre de proteínas asociadas a marcadores se pueden aislar de estos ámbitos, de manera óptima entre el aislamiento días después del 3-5, y son capaces de diferenciarse en células funcionales, producen la saliva acinar. <img src="/files/ftp_upload/2484/2484fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Salisphere formación in vitro. Después de la digestión mecánica y enzimática con el presente Protocolo, las esferas de tamaño cada vez mayor se puede encontrar en las culturas flotante. Los paneles son representativos fase de imágenes de microscopía de contraste de las esferas de los días 0 (A), 4 (B), 7 (C) y 10 (D). Barra de escala = 50 micras.

<ol><li>Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+Sequelae+of+Head+and+Neck+Radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Oral Sequelae of Head and Neck Radiotherapy.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 14, 199-212 (2003).</li>
<li>Nape&ntilde, as, J, J., Brennan, M. T., Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+treatment+of+xerostomia+%28dry+mouth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Odontology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and treatment of xerostomia (dry mouth).</a> Odontology. 97, 76-83 (2009).</li>
<li>Denny, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parenchymal+cell+proliferation+and+mechanisms+for+maintenance+of+granular+duct+and+acinar+cell+populations+in+adult+male+mouse+submandibular+gland%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Parenchymal cell proliferation and mechanisms for maintenance of granular duct and acinar cell populations in adult male mouse submandibular gland.</a> 235, 475-485 (2005).</li>
<li>Man, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+a+perinatal+cellular+phenotype+in+submandibular+glands+of+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Persistence of a perinatal cellular phenotype in submandibular glands of adult rat.</a> J. Histochem. Cytochem. 43, 1203-1215 (1995).</li>
<li>Cotroneo, E., Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+acinar+cells+following+ligation+of+rat+submandibular+gland+retraces+the+embryonic-perinatal+pathway+of+cytodifferentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Regeneration of acinar cells following ligation of rat submandibular gland retraces the embryonic-perinatal pathway of cytodifferentiation.</a> Differentiation. 79, 120-130 (2010).</li>
<li>Eirew, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+quantifying+normal+human+mammary+epithelial+stem+cells+with+in+vivo+regenerative+ability%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A method for quantifying normal human mammary epithelial stem cells with in vivo regenerative ability.</a> Nat Med. 14, 1384-1389 (2008).</li>
<li>Gorjup, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glandular+tissue+from+human+pancreas+and+salivary+gland+yields+similar+stem+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Glandular tissue from human pancreas and salivary gland yields similar stem cell populations.</a> European Journal of Cell Biology. 88, 409-421 (2009).</li>
<li>Alonso, L., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+of+the+skin+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Stem cells of the skin epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, Suppl 1. 11830-11835 (2003).</li>
<li>Lombaert, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> Plos One. 3, e2063-e2063 (2008).</li>
<li>Coppes, R. P., Goot, A. vander, Lombaert, I. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+Cell+Therapy+to+Reduce+Radiation-Induced+Normal+Tissue+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Stem Cell Therapy to Reduce Radiation-Induced Normal Tissue Damage.</a> Seminars in Radiation Oncology. 19, 112-121 (2009).</li>
</ol>

El método de cultivo de tejidos descrito aquí representa un protocolo reproducible para el aislamiento de células madre que contienen salispheres de las glándulas salivales de los ratones. Los estudios que utilizan células aisladas de este modo se ha destacado la capacidad de regeneración de células de la glándula salival madre 9. El trasplante de un centenar de c-Kit + células derivadas de la salispheres inducida recuperación funcional de las glándulas salivales de ratón irradiados. Estos datos son muy interesantes y un punto de partida para la investigación de células madre basado en la terapia para la xerostomía. Muchos caminos quedan por explorar sin embargo, incluyendo el perfil de expresión de los marcadores completa de proteínas de las células madre, la capacidad de las glándulas submandibulares de rescatar la función de las glándulas parótidas irradiados salivales y viceversa, y la caracterización de la supuesta en el nicho de células madre in vivo de las células. En última instancia, la traducción de este protocolo para las muestras de tejido humano y el potencial posterior para el tratamiento de la xerostomía en pacientes humanos con las células aisladas es la aplicación más interesante del método descrito.

<table><tbody><tr><td>Hialuronidasa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Almacenar a &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C</td></tr><tr><td>Colagenasa II</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>17101-015</td><td>Almacenar a 4 &amp;#x00B0;C</td></tr><tr><td>Factor de crecimiento epidérmico-2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Preparar un stock de 10 &amp;#x03BC;g / mL en solución salina tamponada con fosfato (PBS). Almacenar a &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C en alícuotas de un solo uso.</td></tr><tr><td>Factor de crecimiento de fibroblastos-2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0291</td><td>Preparar un stock de 25 &amp;#x03BC;g / mL en PBS. Almacenar a &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C en alícuotas de un solo uso.</td></tr><tr><td>Suplemento N2</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>17502-048</td><td>Según las instrucciones del fabricante.</td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>Preparar un stock de 2 mg / mL en agua del grifo. Ajustar el agua a pH 2-3 usando ácido acético glacial antes de disolver.</td></tr><tr><td>Dexametasona</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Filtros estériles para células con poros de 100 &amp;mu;M</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Tubos redondos de poliestireno con tapas de filtro (tamaño de poro de 50 &amp;mu;M)</td><td>BD Biosciences</td><td>352235</td><td></td></tr></tbody></table>

aislamiento de células de la glándula salival del ratón madre

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Madura glándulas salivales tanto de origen humano y el ratón integrado por un mínimo de cinco tipos de células, cada una de las que facilita la producción y excreción de saliva en la cavidad oral. Las células acinares serosas y mucosas son las proteínas y las mucosas de las fábricas que producen las glándulas, respectivamente, y representan el origen de la producción de saliva. Una vez sintetizados, los diversos componentes proteicos enzimáticos y otros de la saliva se secreta a través de una serie de células ductales epiteliales teniendo morfología de tipo, hasta la expulsión definitiva de la saliva a través de un conducto principal en la cavidad de la boca. La composición de la saliva también es modificado por las células ductales durante este proceso. En la manifestación de enfermedades como el síndrome de Sjögren, y en algunas situaciones clínicas como el tratamiento de radioterapia para el cáncer de cabeza y cuello, la producción de saliva por las glándulas se reduce drásticamente 1,2. La xerostomía como resultado, una sensación subjetiva de boca seca, no sólo afecta a la capacidad del paciente para tragar y hablar, sino que también fomenta el desarrollo de la caries dental y puede ser socialmente debilitante para la víctima. La restauración de la producción de saliva en las condiciones clínicas antes mencionadas por lo tanto, representa una necesidad clínica no cubierta, y como tal, varios estudios han demostrado la capacidad de regeneración de las glándulas salivales 3-5. En relación con el aislamiento de células madre similares a las células de poblaciones de células de diversos tejidos en el ratón y el cuerpo humano 6.8, hemos demostrado mediante el método descrito que las células madre aisladas de las glándulas salivales del ratón se puede utilizar para rescatar a la producción de saliva en la saliva irradiados glándulas 9,10. Este descubrimiento abre el camino para el desarrollo de células madre basado en terapias para el tratamiento de las condiciones de xerostomía en los seres humanos, y también para la exploración de las glándulas salivales como un microambiente que contiene células pluripotentes, con capacidad de auto-renovación.

Un protocolo optimizado para el aislamiento de células madre de la glándula salival del ratón se describe. El método emplea la digestión enzimática y mecánica, y permite el aislamiento de salispheres que contiene células con características de células madre.

Aislamiento de células de la glándula salival del ratón madre

Las glándulas salivales maduras, tanto de origen humano como de ratón, comprenden un mínimo de cinco tipos celulares, cada uno de los cuales facilita la producción y excreción de...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar el aislamiento de células madre putativas a partir de glándulas neuronales de SIV. Esto se logra primero obteniendo glándulas salivales submandibulares de ratones adultos. El segundo paso del procedimiento consiste en usar tijeras curvas para procesar el tejido en una pulpa homogénea.El tercer paso del procedimiento consiste en digerir aún más el tejido utilizando colagenasa y enzimas liasa de mayor actividad. Debe tenerse cuidado de no sobredigerir el tejido. Dado que una suspensión celular completa no produce muchas esferas, los grupos de dos a tres células son óptimos.El paso final del procedimiento es la filtración del homogenato a través de filtros de 100 micrones y 50 micrones. Finalmente, se pueden obtener resultados que muestran el cultivo y aislamiento de células madre de la glándula SIV mediante el uso combinado de digestión mecánica y enzimática de glándulas SIV completas. Las implicaciones de esta técnica se extienden hacia la terapia de la xerostomía, también conocida como boca seca, que puede resultar del tratamiento con radioterapia.Las células madre de las glándulas salivales pueden utilizarse para tratar la xerostomía en pacientes que padecen cánceres de cabeza y cuello. Antes de comenzar este procedimiento, prepare los tampones, el ratón, el cultivo de glándula salival, los medios y las soluciones enzimáticas. Según el protocolo escrito adjunto, todos los pasos de disección y cultivo de tejidos deben realizarse en una campana estéril de cultivo celular.Después de aislar y diseccionar las glándulas salivales del ratón, pese el tejido glandular en una balanza y registre el peso. Utilice una espátula para transferir las glándulas salivales a una pequeña placa de Petri y, con tijeras de disección curvas, triture las glándulas hasta obtener una pulpa homogénea. Corte el extremo de una punta de pipeta P 1000 para crear una abertura más amplia.Utilice esto para pipetear un mililitro de tampón por cada 80 miligramos de tejido en la placa de Petri y transfiera el homogenato a un tubo de centrífuga de 15 mililitros. Añada otro mililitro de tampón por cada 80 miligramos de tejido sobre la placa de Petri. Para recoger cualquier resto de pequeños fragmentos de tejido, agregue esta solución al tubo de centrífuga.Luego agregue rápidamente 250 microlitros de solución de cloruro de calcio, 25 microlitros de solución de hialuronidasa y 25 microlitros de solución de colagenasa. Dos soluciones enzimáticas por cada 80 miligramos de tejido. Coloque el tubo que contiene el tejido y la mezcla enzimática en un baño de agua agitado a 37 grados Celsius e incube durante 20 minutos.Tras la incubación, retire los tubos. Utilice una punta P1000 con el extremo eliminado, como antes, para mezclar completamente el tejido y la solución enzimática aproximadamente 10 veces. Devuelva el tubo al baño de agua a 37 grados Celsius durante 20 minutos adicionales.Después del segundo período de incubación, centrifugue la muestra a 400 veces la gravedad durante ocho minutos; tras la centrifugación, deseche el sobrenadante y resuspenda cuidadosamente el sedimento en dos mililitros de tampón por cada 80 miligramos de tejido inicial. A continuación, añada 250 microlitros adicionales de solución de cloruro de calcio, 25 microlitros de solución de hialuronidasa y 25 microlitros de colagenasa. Dos soluciones enzimáticas por cada 80 miligramos de tejido.Y regrese el tubo al baño de agua agitado a 37 grados Celsius durante 20 minutos. Retire los tejidos del baño de agua y repita según las incubaciones anteriores tras la incubación. Centrifugue la muestra a 400 veces la gravedad durante ocho minutos.Una vez más y luego deseche el sobrenadante. Ahora el tejido está listo para ser lavado en preparación para la filtración tras la centrifugación previa. Pipetee dos mililitros de tampón en el tubo y triture.Suspenda el precipitado palt tras la resuspensión. Centrifugue la muestra a 400 × g durante ocho minutos. Luego deseche el sobrenadante con pipeta.Un mililitro de tampón por cada 80 miligramos de tejido en el tubo, y volver a triturar. Para resuspender el precipitado. Repetir la centrifugación.Centrifugar a 400 veces la gravedad durante ocho minutos. Durante la centrifugación, preparar el paso de filtración colocando un filtro de 100 micrones de tamaño de poro sobre un tubo cónico de 50 mililitros. Tras la centrifugación, desechar el sobrenadante y pipetear un mililitro final de tampón por cada 80 miligramos de tejido en el tubo. Utilizar una punta P1000 con el extremo cortado previamente para pipetear hacia arriba y hacia abajo, asegurándose de que el precipitado se resuspenda completamente.Luego, transfiera el homogenato al filtro de tamaño de poro de 100 micrones y permita que se infiltre a través del filtro hacia el tubo de centrífuga de 50 mililitros. Es importante no aplicar más de tres mililitros de homogenato, ya que el filtro podría obstruirse. Si se supera este volumen, utilice una pipeta P1000 para retirar cualquier tejido que se haya acumulado en la parte inferior del filtro y transfiera este tejido al tubo de centrífuga de 50 mililitros que contiene el filtrado.Utilizando una jeringa de un mililitro equipada con una aguja de calibre 26, aspire el homogenato del tubo centrífugo de 50 mililitros y aplíquelo al filtro con tapa de 50 micrones ajustado sobre el tubo de cinco mililitros. Permita que el homogenato atraviese el filtro. Si la filtración es lenta, afloje la tapa del filtro, ya que podría estar demasiado apretada.Un sello puede evitar la filtración cuando todo el homogenato haya pasado a través del filtro hacia el tubo. Centrifugar la muestra a 400 veces la gravedad durante ocho minutos. Tras la centrifugación, las células sedimentadas están listas para ser sembradas en placa.Las células de la glándula salival comienzan por resuspenderlas en un mililitro de medio MSG por cada 80 miligramos de tejido. Cuente las células según los protocolos estándar. Aquí, se utiliza un contador automático de células para determinar el número de células.Calcule el volumen de suspensión celular necesario para 0,4 veces 10 a la seis células, y a partir de esto, el número de pozos que pueden sembrarse. Añada un mililitro de medio MSG por pozo a una placa de cultivo de 12 pozos. Asegúrese de que la suspensión celular esté bien mezclada y añada el volumen requerido de suspensión celular para 0,4 veces 10 a la seis células a cada uno de los pozos.Transfiera las placas a un incubador a 37 grados Celsius con 5 % de dióxido de carbono. Después de dos días de incubación, examine los cultivos para verificar la presencia de esferas SLO y la ausencia de células ace. Este es un ejemplo de tejido de glándula salival de ratón procesado como se describió y visualizado mediante microscopía de contraste de fase desde cero hasta 10 días en cultivo; las pequeñas agrupaciones de células son esferas SLO, que aumentan de tamaño a lo largo de este período.Se muestra aquí la tinción inmunológica de un cultivo esférico representativo de SLOs de tres a cinco días para el marcador de células madre. Kit de proteína C. Según se analizó mediante citometría de flujo, la expresión del kit de sea confirma la presencia de células madre putativas en los cultivos de SLOs. Las esferas de SLOs de tres a cinco días de edad también pueden diferenciarse para formar estructuras similares a conductos y acinos con morfología semejante a la de las glándulas salivales nativas.Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo aislar glándulas salivales y células madre de glándulas salivales murinas.

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Investigación

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Biology

Biología

Este video muestra la forma de micro-disección del saco vitelino y la aorta-gonadal-mesonefros región a partir de embriones y el uso de la citometría de flujo para clasificar las células madre hematopoyéticas.

El aislamiento de las primeras células madre hematopoyéticas murinas saco vitelino y AGM

La capacidad de las células germinales embrionarias a diferenciarse en células germinales primordiales durante etapas tempranas del desarrollo es un modelo perfecto para hacer frente a nuestra hipótesis sobre el cáncer y la infertilidad. Este protocolo se muestra la forma de aislar las células germinales primordiales de las gónadas en desarrollo de embriones de 10.5 a 11.5 días después de ratón coitum.

El aislamiento y la derivación de células embrionarias de ratón Germinal

Un protocolo para la canalización de la glándula salival submaxilar del ratón a través de conductos de Wharton se describe. Para este experimento, la solución de azul tripán se usa como un tintorero para demostrar cómo esta técnica efectiva entrega infusiones en la glándula blanco, y sugerir la fiabilidad de este nuevo enfoque como un potencial clínico de drogas / terapia celular para la regeneración de las glándulas salivales.

Canulación de la glándula salival submaxilar del ratón a través del conducto de Wharton

Aquí demostramos nuestro protocolo de aislamiento de las células de los conductos glandulares basales y submucosa de tráqueas de ratón. También se demuestra el método de la inyección de células madre en la alfombrilla del ratón grasa dorsal para crear...

Aislamiento de células basales y de células submucosas conducto de la glándula de ratón tráquea

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El aislamiento de células madre del folículo piloso y queratinocitos epidérmicos de la piel dorsal de ratón

Aquí, presentamos un protocolo para el aislamiento de entero, intacto el ratón glándulas mamarias para investigar la expresión de matriz extracelular (ECM) y morfología ductal. Las glándulas abdominales de ratón #4 se extrajeron de ratones femeninos nulíparas del 8-10 semanas de edad fijado en formalina tamponada neutra, seccionadas y teñido mediante inmunohistoquímica para las proteínas de la ECM.

Aislamiento de las glándulas mamarias del ratón intacto, todo para el análisis de expresión de la matriz extracelular y la morfología de la glándula

Aquí, presentamos una nueva técnica microquirúrgica para el aislamiento de las células madre neurales de la eminencia gangliónica E13 ratón embrión.

Aislamiento y cultivo de las células madre neurales embrionarias de ratón

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Presentamos un método para aislar y cultivar células epiteliales derivadas de glándulas salivales humanas primarias. Estas células exhiben patrones de expresión génica consistentes con que son de origen epitelial salival y pueden ser cultivadas como salisferas en matrices de membranas de sótano derivadas de células tumorales Engelbreth-Holm-Swarm o como monocapas en platos de cultivo tratados.

Aislamiento de células epiteliales salivales de glándulas salivales humanas para el crecimiento in vitro como salisferas o monocapas

Las imágenes inmunofluorescentes están limitadas por la capacidad de observar procesos biológicos complejos y dependientes del tiempo en una sola instantánea en el tiempo. Este estudio describe un enfoque de imágenes en vivo realizado en cortes de glándula submandibular de ratón cortados con precisión. Este enfoque permite la observación en tiempo real de las interacciones célula-célula durante la homeostasis y los procesos de regeneración y reparación.

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Aprende a aislar células madre de glándulas salivares de ratón mediante digestión enzimática y mecánica. Este protocolo permite cultivar saliesferas con potencial terapéutico para tratar la xerostomía.

Aislamiento de células de la glándula salival del ratón madre

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