Name: Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-06T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Aprende a establecer un modelo ortotópico de carcinoma de vejiga en ratonas C57BL/6 mediante cateterización y cauterización local. Esta técnica minimamente invasiva permite adherir células MB49 para estudiar el microambiente tumoral y evaluar intervenciones terapéuticas en oncología.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabajo fue financiado por el premio Nacional de Ciencias CARRERA Foundation (CBET-0846395) y el Departamento de Medicina Comparada, Universidad de Tulane.

1. Los animales <ol><li> Ratones hembra C57BL/6J (Mus musculus) se verifican libres de ectoparásitos contagiosa, endoparásitos helmintos, y los anticuerpos a 17 virus murinos por el proveedor antes del envío. Los ratones se encuentran en las instalaciones de animales AAALAC acreditado por la Universidad de Tulane, de acuerdo con la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio 1. </li><li> En concreto, los ratones son alojados en grupo (4-5 ratones / jaula) en forma individual con ventilación tapas de policarbonato microaislamiento cageswith filtro de cama de madera dura. Se les proporciona alimentación ad libitum de roedores granulado y el agua del grifo. </li><li> Los ratones se les permite de 7 días para aclimatarse antes del inicio del estudio. </li></ol> 2. Las células <ol><li> El carcinoma de células transicionales murino línea celular MB49 se utiliza para producir los tumores de vejiga. </li><li> Las células se cultivaron en medio Dulbecco modificado de Eagle suplementado con suero fetal bovino al 10%, 100 unidades / ml de penicilina, y 100 unidades / ml de estreptomicina. </li><li> Cultivos se mantienen a 37 º C y 5% de CO 2 con los medios de comunicación cambia cada dos o tres días. </li></ol> 3. Animales modelo de tumor ortotópico La instilación de la modelo de tumor de vejiga se describe aquí es una modificación del procedimiento descrito por Gunther et al 2. <ol><li> La anestesia se indujo con 2% de isoflurano (MWI / VetOne, Meridian, ID, Cat. # 501017) en el oxígeno y se mantiene en 0,75-1,25%. (Varios animales pueden ser tratados al mismo tiempo, lo que exigiría un aumento en los niveles de isoflurano.) Para evitar que se seque la córnea, los ojos están lubricados con un ungüento oftálmico lágrimas artificiales. El calor del cuerpo se mantiene con un cojín calentado bajo una cortina de papel. </li><li> La piel de la espalda baja se recorta para promover el contacto con la placa de puesta a tierra de metal, y la zona de afeitado está recubierta con gel electroconduction. </li><li> Cada ratón se colocan individualmente en recumbancy dorsal sobre una placa de metal a tierra, y la vejiga se sondaje transuretral con un lubricado de calibre 24, 3 / 4 pulgadas, el exceso de la aguja del catéter IV con el estilete eliminado. </li><li> La vejiga urinaria se vacía de orina, y un alambre de platino se inserta a través del catéter en la vejiga urinaria dejando el cable expuesto en cada extremo de la sonda - de aproximadamente 2 mm en el extremo de la luz del catéter. El cable es de platino debido a la resistencia del material a la oxidación. </li><li> Una corriente de 2,5 W se aplica luego a la vejiga durante aproximadamente 0,5 segundos al tocar la parte exterior del cable con una unidad de electrocauterio establecido en la coagulación. </li><li> El alambre se mueve entonces a un segundo lugar en la vejiga y otra carga de 2,5 W aplicada. </li><li> Se retira el alambre, y 100 l de MB49 células a una concentración de 1x10 6 células / ml se inculca a través del catéter en la vejiga a través de una jeringa de 1 ml. </li><li> Las jeringas son colocada en los catéteres para evitar flujo de salida de las suspensiones celulares, y los ratones sondaje se mantienen bajo anestesia durante 90 minutos para permitir que las células se unen a los sitios de quema. </li><li> 100-200 l de solución salina normal se administra por inyección IP a cada ratón antes de la recuperación. </li><li> Al final del período de incubación de los catéteres se retiran y los animales se les permitió recuperarse en el teclado se calienta hasta reflejos de enderezamiento vuelta, momento en el que los ratones son devueltos a sus jaulas. </li></ol> 4. Ultrasonido <ol><li> Los tumores se dejaron crecer durante 3-5 días antes de los ratones someterse a un examen de ultrasonido de la vejiga urinaria para monitorizar el crecimiento del tumor. </li><li> Para los exámenes de ultrasonido inicial, los animales son anestesiados como se describió anteriormente. Los ratones se colocan en recumbancy dorsal, y la piel del abdomen se prepara recorte de la piel. </li><li> Un catéter de calibre 24 IV se inserta en transuretral de la vejiga urinaria. En este punto, la vejiga puede ser drenado y la orina recogida para su posterior análisis. </li><li> 100 l de solución salina estéril se instila en la vejiga a través del catéter para mejorar la visibilidad de la vejiga en la ecografía. </li><li> Gel para ultrasonido de conducción se aplica en el abdomen y la ecografía se realiza para evaluar la pared de la vejiga y de la luz. </li></ol> 5. Los resultados representativos: Tejido del tumor comienza a aparecer 3-5 días después de la inoculación. En nuestra experiencia, en un grupo de 12 ratones, 50% o más habitualmente tienen una masa de tejido detectable dentro de la vejiga (0,5 hasta 1,0 l, con V = π / 6 · L · W · h) por cinco días. Cuando se utiliza MB 49 células, los tumores seguirá creciendo y la eutanasia debe ser enviado hasta el día 24 si los ratones sin tratar. La eutanasia se recomienda cuando los ratones se letárgico o caquexia, la pantalla de pieles erizadas, encorvado, y el comportamiento no responde, o cuando pierden el 20% de su peso corporal inicial. &lt;/ P&gt; Que los tumores crecen rápidamente y tienen centros de necrosis después de llegar a una masa de 200 mg o más, 3 ostensiblemente porque las células en el tumor en desarrollo proliferan más rápido de lo que puede ser reparado por el suministro de sangre angiogénico. También se puede controlar indirectamente la progresión del tumor a través del nivel de hematurea, que está presumiblemente relacionada con la angiogénesis en los tumores de rápido desarrollo. Se observó consistentemente que la orina de tratar ratones con tumores restos de sangre el día 14. La concentración de los glóbulos rojos parece aumentar con el tiempo en estos ratones, y los volúmenes de orina recogida disminuido. Los tumores de más de 50 mg también se puede palpar con relativa facilidad, por lo general por 14 días después de la inoculación.

<ol><li>Institute of Laboratory Animal Resources. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).</li>
<li>Gunther, J. H., Jurczok, A., Wulf, T., Brandau, S., Deinert, I., Jocham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Zhang, X., Atala, A., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression-targeted+gene+therapy+for+the+treatment+of+transitional+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Expression-targeted gene therapy for the treatment of transitional cell carcinoma.</a> Cancer Gene Ther. 15, 543-552 (2008).</li>
</ol>

Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el cuidado institucional y el empleo de la Universidad de Tulane.

Este método mínimamente invasivo para el establecimiento de los tumores de vejiga ortotópica en ratones hembras también se puede aplicar a otros tipos de células de MB49, a pesar de los diferentes resultados se deben anticipar. Al menos agresiva células tumorales se utilizan, aumentando ligeramente la potencia (con incrementos de 0,5 W para establecer el nuevo óptimo) rendirá un área más susceptible a la conexión de las células tumorales, y los tiempos de incubación de la vejiga para que las células inculcado dará lugar...

<table><tbody><tr><td>Ratones C57Bl/6J</td><td>Laboratorio Jackson</td><td>000664</td><td>de 3 a 5 semanas de edad</td></tr><tr><td>Jaulas de policarbonato y estante ventilado</td><td>Lab Products</td><td>Super Mouse 750</td><td>327 mm x&lt;br/&gt;190 mm x&lt;br/&gt;143 mm</td></tr><tr><td>Camada de madera dura</td><td>Harlan Laboratories</td><td>SaniChips de grado para laboratorio&amp;#8211;</td><td></td></tr><tr><td>Dieta para roedores</td><td>Harlan Laboratories</td><td>Dieta para Roedores 2019</td><td></td></tr><tr><td>Catéter intravenoso</td><td>MWI Veterinary Supply</td><td>009231</td><td>24 G x &amp;#190; in.</td></tr><tr><td>Unidad de electrocoagulación</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>Aaron 900</td><td></td></tr><tr><td>Unidad de ultrasonido</td><td>Sonosite</td><td>180 Plus (Vet)</td><td></td></tr><tr><td>Línea celular MB49</td><td>Centro Médico Universitario Bautista de Wake Forest</td><td>N.A.</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>21063-029</td><td></td></tr><tr><td>Suero bovino fetal</td><td>Gemini Bio Products</td><td>100106 500A57B</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina-Estreptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr></tbody></table>

un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

En este sencillo procedimiento, los tumores de vejiga se establecen en las mujeres ratones C57 a través del uso de la cateterización, la cauterización local, y la adhesión celular posterior. Después de su vejiga está transuretral sondaje y drenaje, los animales son una vez más por sondaje para permitir la inserción de un alambre de platino en la vejiga sin dañar la uretra o la vejiga. Los catéteres están hechos de teflón para servir como aislante para los cables, que conducen la corriente eléctrica en la vejiga para crear una lesión por quemadura. Una unidad de electrocauterio son utilizados para entregar 2,5 W para el extremo expuesto del cable, quemando capas extracelular y proporcionar sitios de unión de las células de carcinoma que se entregan en la suspensión de la vejiga a través de un cateterismo posterior. Las células permanecen en la vejiga durante 90 minutos, tras lo cual los catéteres se retiran y la vejiga se deja escurrir de manera natural. El desarrollo de tumor se controla a través de ultrasonido. Se presta especial atención a la técnica de cateterismo en el video que lo acompaña.

Los tumores de vejiga se establecen en las hembras de una forma mínimamente invasiva a través de cateterismo, la cauterización local, y posterior adhesión de las células cancerosas a los sitios de quema.

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino

En este procedimiento sencillo, se inducen tumores vesicales en ratones C57 hembra mediante el uso de cateterismo, cauterización local y...

Este es el profesor WT Godbe y junto con la Dra. Georgina Dobe, nos gustaría presentar un método para establecer un modelo ortotópico de carcinoma murino de vejiga. Comencemos con los pasos que seguimos para preparar a nuestros animales para este procedimiento. Los ratones que mostramos hoy son hembras C57BL/6 adquiridos de los Laboratorios Jackson.Seleccionamos hembras debido a la facilidad de cateterización. Estos ratones tienen entre tres y cinco semanas de edad, y generalmente pesan entre 16 y 20 gramos. Se anestesian usando un ventilador que está ajustado para administrar isoflurano al 2% en oxígeno a un flujo de 0,8 a un litro por minuto. Las frecuencias respiratorias se monitorean constantemente para prevenir el secado corneal.Durante este procedimiento, que dura más de una hora y media, los ojos se lubrican con una pomada oftálmica de lágrimas artificiales que se aplica directamente sobre los ojos y luego se desliza hacia el interior de los mismos a través del pelaje; asimismo, se recorta el vello de la parte baja de la espalda para favorecer el contacto con la placa metálica de conexión a tierra, la cual se utilizará durante el procedimiento de electrocoagulación que produ

an-orthotopic-model-of-murine-bladder-cancer

Research

Investigación

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Vejiga ratón inyección de pared es un enfoque útil para el estudio de células de vejiga ortotópicamente madre y la biología del cáncer. Este método de microcirugía delicada se puede dominar con una técnica cuidadosa y práctica.

Vejiga ratón pared de inyección

El establecimiento de un modelo de tumor de vejiga ortotópica para evaluar los efectos antitumorales de SARNA intravesical entrega y el control del crecimiento tumoral mediante ecografía y bioluminiscente.

Un modelo de tumor vesical ortotópica y la Evaluación de tratamiento intravesical SARNA

En este video, describimos el trasplante ortotópico de organoides de tumores de vejiga cultivados a la vejiga murina para estudiar el papel del entorno de los órganos en el desarrollo de tumores.

Modelo de organoide tumoral vesical: un método para el trasplante ortotópico de organoides vesicales en vejiga murina receptora

En este video, describimos el procedimiento intravesical de administrar células cancerosas en la vejiga de un modelo de ratón. Este procedimiento ayuda a generar un modelo ortotópico de tumor vesical que se puede utilizar para desarrollar estrategias terapéuticas.

Modelado de tumor ortotópico de vejiga en modelo de ratón: un procedimiento para la administración intravesical de células cancerosas en la vejiga murina

Implantación de células de cáncer en el órgano de origen puede servir como un modelo preclínico útil para evaluar nuevas terapias. Células de carcinoma de vejiga MB49 se pueden cultivar dentro de la vejiga después de la instilación intravesical. Este protocolo demuestra la cateterización de la vejiga de ratón para el propósito de la implantación del tumor y la entrega adenoviral.

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga de Estudios de liberación de genes

Una N-butil-N-(4-hidroxibutil) nitrosamina inducida modelo de cáncer de vejiga fue desarrollado en mucina humana 1 (MUC1) ratones transgénicos para el propósito de las pruebas de MUC1-inmunoterapia dirigida. Después de la administración de una vacuna de péptido MUC1-específica, una respuesta de linfocitos T citotóxicos para MUC1 se confirmó mediante la medición de los niveles séricos de citocinas y la actividad de células T específicas.

La inducción de la transición de vejiga invasivo Carcinoma en inmune intacto humanos MUC1 Ratones Transgénicos: Un Modelo para el Desarrollo Inmunoterapia

La técnica establecida para inocular ortotópico xenoinjertos de cáncer de vejiga invasivos primarios requiere laparotomía y la movilización de la vejiga. Este procedimiento inflige una morbilidad significativa en los ratones, es técnicamente difícil y consume mucho tiempo. Lo tanto, desarrolló una alta precisión, abordaje percutáneo utilizando la guía del ultrasonido.

Mínimamente Invasiva Establecimiento de murino ortotópico xenoinjertos vejiga

Este protocolo describe la generación de tumores de vejiga ortotópico murino en ratones C57BL / 6J hembra y el seguimiento del crecimiento del tumor.

Un Modelo de tumor y el tumor murino ortotópico de vejiga Sistema de Detección

Este protocolo describe la generación de modelos de xenoinjerto ortotópico derivados del paciente inculcando intravesicamente células carcinoma de células uroteliales de alto grado o inyectando intrarectalmente células cancerosas colorrectales en combinación diabética/grave no obesa ratones de inmunodeficiencia (NOD/SCID) para el crecimiento tumoral primario y metástasis espontáneas bajo la influencia de células estromales de ganglios linfáticos, lo que imita la progresión de las enfermedades...

Modelos de xenoinjerto ortotópico derivados del paciente para el carcinoma de células uroteliales humanas y el crecimiento tumoral del cáncer colorrectal y la metástasis espontánea

Este protocolo proporciona pasos experimentales detallados para establecer un cultivo tridimensional in vitro de organoides tumorales de vejiga derivados del cáncer de vejiga murina inducido por carcinógenos. Se describen métodos de cultivo que incluyen el passaging, la ingeniería genética y el trasplante ortotópico de organoides tumorales.

Cultivo, manipulación y trasplante ortotópico de organoides tumorales de la vejiga de ratón

Aprende a establecer un modelo ortotópico de carcinoma de vejiga en ratonas C57BL/6 mediante cateterización y cauterización local. Esta técnica minimamente invasiva permite adherir células MB49 para estudiar el microambiente tumoral y evaluar intervenciones terapéuticas en oncología.

Un modelo ortotópico de cáncer de vejiga murino

Explorar más videos