Name: Micro-disección de cerebro de rata para el ARN o la extracción de proteínas a partir de región específica del cerebro (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-08-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 31 s
Description: Aprenda la micro-disección de cerebro de rata para extraer ARN y proteínas de regiones específicas como bulbo olfatorio, corteza frontal, estriado e hipocampo. Esta técnica preserva la integridad tisular para investigaciones en neurociencia.

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Paso 1 Sacrificio de la rata de acuerdo a los protocolos establecidos. Quitar el cerebro en el cráneo y enjuague en el hielo frío DEPC tratados agua Milli Q para eliminar la sangre de la superficie. Paso 2 Colocar en placa de metal frío. Cortar el cerebro bi-media en el hemisferio derecho e izquierdo. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_3/269_Figure-01.png" alt="269_Figure-01" width="474" height="224" /> Figura 1. Las posiciones de corte desde el punto de vista medial del hemisferio rata Paso 3 Recoger el bulbo olfatorio derecho después del primer corte. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_4/269_Figure-02.png" alt="269_Figure-02" width="564" height="145" /> Figura 2. Disección bulbo olfatorio Paso 4 Recoge el derecho de la corteza frontal después del segundo corte con una cuchilla y una pinza de Dumont N º 5. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_5/269_Figure-03.png" alt="269_Figure-03" width="566" height="220" /> Figura 3. Frontal disección de la corteza Paso 5 Recoger el cuerpo estriado (núcleo caudado) justo después del tercer corte con la ayuda de dos pinzas Dumont N º 5. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_6/269_Figure-04.png" alt="269_Figure-04" width="555" height="208" /> Figura 4. Estriado (núcleo caudado) la disección Paso 6 Para recoger el hipocampo, coloque la cara ventral del cerebro y luego quitar el cerebro medio para exponer el hipocampo. Diseccionar el hipocampo de la corteza con dos pinzas Dumont N º 5. Flash congelar la muestra en nitrógeno líquido y se almacenan a -80 ° C. <img src="/files/ftp_upload/old/269_2008_7_19_7/269_Figure-05.png" alt="269_Figure-05" width="559" height="191" /> Figura 5. Hipocampo disección

<ol><li>Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).</li>
<li>Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).</li>
</ol>

Los animales fueron manejados de acuerdo con el protocolo para el uso de animales en la investigación aprobada por el Comité sobre el uso de animales vivos para la Enseñanza y la Investigación (CULATR) en la Universidad de Hong Kong y de acuerdo con los Institutos Nacionales de Salud directrices para el uso de animales.

Diferentes regiones del cerebro asociado con diferentes enfermedades neurodegenerativas. Por ejemplo, la corteza frontal y el estriado se relacionan con la enfermedad de Parkinson s, mientras que el hipocampo se relaciona con la enfermedad de Alzheimer. Precisa micro-disección del cerebro que nos permite detectar los cambios de ARNm y proteínas en la región afectada con mayor precisión.

<table><tbody><tr><td>Microscopio</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Herramientas de disección</td><td></td><td></td><td>Placa de metal, pinzas, hoja, etc. Envueltas individualmente con papel de aluminio y calentadas a 180 °C durante ocho horas para eliminar RNasas. Enfriarlas hasta que estén heladas antes de usarlas.</td></tr></tbody></table>

micro-disección de cerebro de rata para el arn o la extracción de proteínas a partir de región específica del cerebro

Micro-dissection of Rat Brain for RNA or Protein Extraction from Specific Brain Region

Micro-disección de cerebro de rata en las distintas regiones es muy importante para el estudio de diferentes enfermedades neurodegenerativas. Este video muestra la micro-disección de las cuatro regiones del cerebro importantes incluyen bulbo olfatorio, corteza frontal, el cuerpo estriado y el hipocampo en el tejido fresco cerebro de rata. Consejos útiles para la eliminación rápida de las regiones respectivas para evitar la degradación de proteínas y ARN del tejido se dan.

Micro-disección de cerebro de rata para el ARN o la extracción de proteínas a partir de región específica del cerebro

La microdisección del cerebro de rata en diversas regiones es sumamente importante para el estudio de diferentes enfermedades neurodegenerativas. Este video demuestra...

Hola, soy Quint del Departamento de Anatomía de la Universidad de Hong Kong. Hoy voy a explicar cómo microdiseccionar el cerebro rojo en cuatro vías principales: la corteza del factor A, la capa s del hipocampo. Aquí se muestra una imagen esquemática que ilustra cómo diseccionamos el cerebro.Hay tres cortes. El primer plano de corte está en la conexión entre el bulbo olfatorio y la corteza frontal. El segundo plano de corte está en la región del cuerpo calloso.El tercer plano de corte está en la punta anterior de los fonos. Después de tres cortes, habrá cuatro trayectos cerebrales. En el lado izquierdo se encuentra un factor.En el lado derecho se encuentra el hipocampo. La corteza frontal se sitúa entre el primer y el segundo corte. La nucleasa codificante, que forma parte del estrato, se encuentra entre el segundo y el tercer corte en el hemisferio cerebral fresco.Es muy importante reconocer primero el cuerpo calloso y las fibras longitudinales. Luego podemos localizar fácilmente los tres cortes. El primer plano de corte se encuentra en la conexión entre un bulbo de factor y la corteza frontal.El segundo plano de corte está en una región del cuerpo calloso, y el tercer plano de co

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Investigación

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Biology

Biología

El perfilado de la expresión de ARN en regiones cerebrales discretas del ratón requiere una estrategia precisa y reproducible de recolección de tejido. Aquí se describe un protocolo que utiliza tanto la sección coronal del cerebro como la microdisección asistida por punzón tisular. El rendimiento y la calidad del ARN total obtenido a partir de las muestras resultantes confirman la utilidad del método descrito.

Sin láser y de captura de enfoque de Microscopía de la microdisección de regiones discretas del cerebro del ratón para el aislamiento de ARN total y Downstream secuenciación de próxima generación y de perfiles de expresión génica

Se describe un modelo de rata de trastorno de estrés postraumático (TEPT), que revela las alteraciones persistentes en la función neuroendocrina y el retraso a largo plazo, la respuesta temor exagerado, característicos de pacientes con TEPT. El modelo animal y los métodos descritos aquí son útiles para la correlación de biomarcadores en núcleos cerebrales, que son mecanicista, pero no se puede medir en los pacientes, con biomarcadores en la sangre periférica de células blancas, que pueden.

Biomarcadores en un modelo animal para Revelar correlatos neurales, hematológicas y conductuales de estrés postraumático

Este video muestra el proceso de aislar microvasos cerebrales de ratas sacrificadas. Incluye la disección del cerebro, la limpieza del tejido y la digestión mecánica, seguida de una centrifugación repetida para aislar la fracción pura de los microvasos.

Un método para el aislamiento de unidades neurovasculares a partir de cerebro de rata

Este video demuestra la detección de la síntesis de ARN del receptor de serotonina utilizando sondas de oligonucleótidos en tejido cerebral de rata afectado por el síndrome de serotonina. El protocolo incluye pretratamiento de tejidos, hibridación de sondas y detección enzimática para visualizar y cuantificar la expresión del ARN del receptor de serotonina bajo un microscopio.

Hibridación in situ mediante sondas de oligonucleótidos para estudiar la expresión de ARN en secciones de cerebro de rata

La expresión de genes de un subconjunto de células en un tejido específico representa un reto importante. En este artículo se describe cómo aislar el ARN total de alta calidad a partir de una población de células específicas mediante la combinación de un método immunolabeling rápida con láser captura microdissection.

Aislamiento de ARN a partir de células subpoblaciones específicas utilizando láser captura Microdissection Combinado con Rapid Immunolabeling

Aquí, se describe un método para el aislamiento de microvasos de cerebro de rata y para la preparación de las muestras de la membrana. Este protocolo tiene la ventaja clara de producir enriquecido microvessel muestras con proteínas aceptable rendimiento de animales individuales. Muestras pueden utilizarse para análisis de proteína sólida en el endotelio microvascular cerebral.

Un método Simple y Reproducible para preparar muestras de membrana de microvasos de cerebro recién aislado de rata

Proporcionamos un protocolo para el aislamiento de la microglia de diferentes regiones diseccionadas de un hemisferio cerebral de ratón adulto, seguido de la preparación de la biblioteca semiautomática para la secuenciación profunda de ARN de una sola célula de transcriptomes de longitud completa. Este método ayudará a dilucidar la heterogeneidad funcional de la microglia en salud y enfermedad.

Aislamiento de microglia específica de la región del hemisferio cerebral de un ratón adulto para la secuenciación profunda del ARN de una sola célula

Este procedimiento describe la recolección de regiones cerebrales congeladas discretas para obtener proteínas y ARN de alta calidad utilizando herramientas baratas y comúnmente disponibles.

Colección de regiones cerebrales de roedores congelados para análisis posteriores

Presentamos un protocolo práctico, paso a paso, rápido para la extracción del cerebro del ratón y la disección de regiones discretas del tejido cerebral fresco. La obtención de regiones cerebrales para el análisis molecular se ha convertido en una rutina en muchos laboratorios de neurociencia. Estas regiones cerebrales se congelan inmediatamente para obtener datos transcriptómicos de alta calidad para el análisis a nivel de sistema.

Microdisección del cerebro del ratón en regiones funcional y anatómicamente diferentes

La combinación de microdisección de captura láser y RT-qPCR microfluídica proporciona especificidad anatómica y biotecnológica en la medición del transcriptoma en neuronas individuales y glía. La aplicación de métodos creativos con el enfoque biológico de un sistema para la enfermedad psiquiátrica puede conducir a avances en la comprensión y el tratamiento, como la hipótesis de la neuroinflamación antirecompensa en la adicción.

Investigación de los impulsores de la antirecompensa en el comportamiento de adicción con métodos de expresión génica unicelular anatómicamente específicos

Aprenda la micro-disección de cerebro de rata para extraer ARN y proteínas de regiones específicas como bulbo olfatorio, corteza frontal, estriado e hipocampo. Esta técnica preserva la integridad tisular para investigaciones en neurociencia.

Micro-disección de cerebro de rata para el ARN o la extracción de proteínas a partir de región específica del cerebro

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