Name: El trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones C57BL/6J (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 1 s
Description: Aprende el trasplante ortotópico de células del estroma mamario y células de carcinoma en ratones C57BL/6J. Este método permite analizar las interacciones estroma-epitelio durante el desarrollo tumoral en un contexto fisiológico.

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Este proyecto fue financiado por el NIH / NCI número de concesión R00 CA127357 y la Universidad de Kansas Centro de Cáncer de Dotación.

<ol><li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li>
<li>Cunha, G., Hom, Y. K., Young, P., Brody, J. Methods in Mammary Gland Biology. Asch, B. B., Ip, M. M. , Kluwer Academic/Plenum Publishers. New York. (2000).</li>
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<li>DeNardo, D. G., Johansson, M., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+cells+as+mediators+of+solid+tumor+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Immune cells as mediators of solid tumor metastasis.</a> Cancer Metastasis. 27, 11-18 (2008).</li>
<li>Naito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Macrophage+differentiation+and+function+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Pathol+Int%22%5BJournal%5D)">Macrophage differentiation and function in health and disease.</a> Pathol Int. 58, 143-155 (2008).</li>
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<li>Cheng, N., Chytil, A., Shyr, Y., Joly, A., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+Hepatocyte+Growth+Factor+Signaling+by+Type+II+Transforming+Growth+Factor-%7Bbeta%7D+Receptor+Knockout+Fibroblasts+Promotes+Mammary+Tumorigenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Enhanced Hepatocyte Growth Factor Signaling by Type II Transforming Growth Factor-{beta} Receptor Knockout Fibroblasts Promotes Mammary Tumorigenesis.</a> Cancer Res. 67, 4869-4877 (2007).</li>
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<li>Raschke, W. C., Baird, S., Ralph, P., Nakoinz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+macrophage+cell+lines+transformed+by+Abelson+leukemia+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus.</a> Cell. 15, 261-267 (1978).</li>
<li>Shen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immortalization+of+endothelial+cells+differentiated+from+mouse+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Shi+Yan+Sheng+Wu+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">Immortalization of endothelial cells differentiated from mouse embryonic stem cells.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 35, 218-228 (2002).</li>
<li>Wang, S. J., Greer, P., Auerbach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+yolk-sac-derived+endothelial+cells+from+a+hypervascular+transgenic+mouse+expressing+a+gain-of-function+fps%2Ffes+proto-oncogene%5BTitle%5D)+AND+%22In+Vitro+Cell+Dev+Biol+Anim%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of yolk-sac-derived endothelial cells from a hypervascular transgenic mouse expressing a gain-of-function fps/fes proto-oncogene.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 292-299 (1996).</li>
<li>Tiede, B. J., Owens, L. A., Li, F., DeCoste, C., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+mouse+model+for+non-invasive+single+marker+tracking+of+mammary+stem+cells+in+vivo+reveals+stem+cell+dynamics+throughout+pregnancy%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A novel mouse model for non-invasive single marker tracking of mammary stem cells in vivo reveals stem cell dynamics throughout pregnancy.</a> PLoS One. 4, e8035-e8035 (2009).</li>
<li>Guzman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracarotid+injection+of+fluorescence+activated+cell-sorted+CD49d-positive+neural+stem+cells+improves+targeted+cell+delivery+and+behavior+after+stroke+in+a+mouse+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Intracarotid injection of fluorescence activated cell-sorted CD49d-positive neural stem cells improves targeted cell delivery and behavior after stroke in a mouse stroke model.</a> Stroke. 39, 1300-1306 (2008).</li>
<li>Duda, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+transplantability+of+tumor-associated+stromal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Differential transplantability of tumor-associated stromal cells.</a> Cancer Res. 64, 5920-5924 (2004).</li>
</ol>

Los experimentos con animales: Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por el comité de IACUC de la Universidad de Kansas Medical Center.

La contribución funcional de los fibroblastos en la progresión tumoral se ha demostrado a través de modelos de trasplante, en el que el carcinoma de fibroblastos asociados co-trasplante con resultados benignos de mama células epiteliales en un mayor crecimiento del tumor y la invasión 5. Los enfoques convencionales de trasplante han involucrado el uso de ratones SCID o desnudo a las células de trasplante de co-estromales y epiteliales de diferentes orígenes genéticos del ratón o de diferentes especies. Ratone...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> C57BL/6N ratones </td><td> Harlan </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> MMTV-PyVmT ratones transgénicos </td><td> Jackson laboratorios </td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td> De suero fetal bovino </td><td> Pescador </td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilina / estreptomicina </td><td> Pescador </td><td> MT-30-001 </td><td></td></tr><tr><td> anfotericina </td><td> pescador </td><td> BP2645-20 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon columnas de filtración Ultracel 50k </td><td> Millipore </td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de rotor Beckman TI </td><td> Beckman </td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td> Rata cola de colágeno </td><td> Pescador </td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> EBSS 10x </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7510-100ML </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina 1X, un 0,25% en HBSS w / o calcio y magnesio </td><td> Pescador </td><td> MT-25-050-CI </td><td></td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> Pescador </td><td> A491-212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie azul </td><td> Pescador </td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> T3924-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Colagenasa A </td><td> Sigma AldrichC0130-50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> DNasa </td><td> Sigma Aldrich </td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td> Kaleidoscope estándar de proteínas </td><td> Biorad </td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td> Portaobjetos de vidrio </td><td> Pescador </td><td> 12545-78 </td><td></td></tr><tr><td> Cubreobjetos de vidrio </td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentina anticuerpos S-20 </td><td> Santa Cruz de Biotecnología </td><td> SC-7558 </td><td></td></tr><tr><td> α-actina de músculo liso </td><td> Abcam </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14 anticuerpos </td><td> Santa Cruz de Biotecnología </td><td> sc-53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18 anticuerpos </td><td> Abcam </td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Sigma Aldrich </td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-ratón biotinilado </td><td> Vector de laboratorios </td><td> BA9200 </td><td> Distribuido a través de Fisher </td></tr><tr><td> Anti-ratón-alexa-568 </td><td> Invitrogen </td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-ratón-alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td> Estreptavidina-alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td> Prolongar Antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P-36930 </td><td></td></tr><tr><td> Tijeras quirúrgicas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 91400-12 </td><td></td></tr><tr><td> Tijeras finas primavera </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 15000-02 </td><td></td></tr><tr><td> Blunt fórceps </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 11002-12 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 pinzas finas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> Intestino sutura crómica </td><td> Pescador </td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td> Pipeta Pasteur de vidrio </td><td> Pescador </td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Pescador </td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> betadine </td><td> pescador </td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td> Clips de la herida </td><td> Pescador </td><td> 12032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Herida de primera necesidad </td><td> Pescador </td><td> 12031-07 </td><td></td></tr></tbody></table>

el trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones c57bl/6j

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

La influencia de las células del estroma, incluyendo los fibroblastos en la progresión del tumor de mama ha sido bien documentada a través de la utilización de modelos de ratón, en particular a través del trasplante de células del estroma y las células epiteliales en la glándula mamaria de ratones. Los modelos actuales del trasplante a menudo incluyen el uso de ratones inmunodeficientes, debido a los diferentes orígenes genéticos de las células del estroma y células epiteliales. Matrices extracelulares se utilizan a menudo para integrar los dos tipos diferentes de células de consistente interacciones célula-célula, sino que implican el uso de Matrigel o colágeno cola de rata, que son sustratos inmunogénica. La falta de funcionamiento las células T de ratones inmunodeficientes impide una evaluación precisa de las células del estroma en la progresión del tumor mamario en vivo, con importantes implicaciones en el desarrollo de fármacos y su eficacia. Por otra parte, los ratones inmunodeprimidos son costosos, difíciles de reproducir y requiere condiciones especiales de atención. Para superar estos obstáculos, hemos desarrollado un método para el trasplante de células del estroma ortotópicamente y las células epiteliales en ratones a partir de los mismos antecedentes genéticos para inducir la formación de tumores consistente. Este sistema consiste en la recolección normal, carcinoma de los fibroblastos asociados, PyVmT células de carcinoma de mama y el colágeno de donantes ratones C57BL/6J. Las células son entonces integrados en el colágeno y trasplantados en las glándulas mamarias de las mujeres inguinal ratones C57BL/6J. El trasplante de células PyVmT hablar de formar tumores palpables 30-40 días después del trasplante. Análisis de seguridad de 60 días indica que la co-trasplante con los fibroblastos aumenta el crecimiento del tumor de mama en comparación con las células trasplantadas PyVmT solo. Mientras que las células y la matriz de ratones C57BL/6J fueron utilizados en estos estudios, el aislamiento de células y la matriz y el enfoque del trasplante puede ser aplicado a ratones de diferentes bases genéticas que demuestran la versatilidad. En resumen, este sistema puede ser usado para investigar las interacciones moleculares entre las células del estroma y las células epiteliales, y supera las limitaciones críticas en modelos de ratones inmunodeficientes.

En este informe, demuestran un sistema para aislar y cultivar células de donantes de la glándula mamaria de ratón, y ortotópicamente trasplante de estas células en ratones receptores para analizar estroma: interacciones epiteliales durante el desarrollo de tumores mamarios.

El trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones C57BL/6J

La influencia de las células estromales, incluidos los fibroblastos, en la progresión de los tumores mamarios ha sido ampliamente documentada mediante el uso de modelos murinos, en particular...

El objetivo general de este procedimiento es trasplantar células estromales y epiteliales de MA para estudiar los efectos de las interacciones estromales-epiteliales sobre la formación de tumores tras el trasplante. Esto se logra primero recolectando tejido de la cola y extrayendo colágeno donante de fibroblastos donantes de ratones C 57 black six; a continuación, se aíslan y cultivan células epiteliales de ratones normales y/o transgénicos M-M-T-V-P-Y-V-M-T. Sobre el fondo genético C 57 black six, las células se incorporan luego al colágeno y se siembran en placas de cultivo celular en forma de tapones circulares.Finalmente, las células embebidas en colágeno se trasplantan en los lechos grasos de las glándulas mamarias inguinales del ratón receptor. Existen varias ventajas al utilizar este sistema frente a los enfoques existentes, como la generación de ratones knockout condicionales o el trasplante en ratones inmunodeprimidos. Una ventaja es que el sistema es relativamente fácil de establecer.Otra ventaja es que los ratones receptores tienen un sistema inmunitario intacto, lo que permite a los investigadores analizar el papel de moléculas específicas y de las interacciones estroma

mammary-transplantation-stromal-cells-carcinoma-cells-c57bl6j

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En este artículo se muestra el procedimiento desarrollado por Enviaselo...

Procedimiento de mama epiteliales de Trasplantes

En este artículo discutimos cómo establecer un modelo de cáncer de mama en ratones hembra inyectando células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria. En el protocolo de ejemplo se muestra la inyección ortotópica.

Inyección ortotópica en la almohadilla de grasa mamaria: establecimiento del cáncer de mama en ratones

El video muestra la técnica de inoculación ortotópica del cáncer de mama en un modelo de ratón. Esta técnica produce una alta tasa de tumorigénesis con menos variabilidad en el tamaño y la forma del tumor en comparación con la inyección subcutánea o no quirúrgica.

Inyección ortotópica: implantación de células cancerosas específicas de tejido en un ratón adulto

La activación de mutaciones latentes con adenovirus Cre en los resultados del sistema ductal de mama en un cáncer de mama metastásico clínicamente relevante. La incorporación de un promotor YFP permite el seguimiento de las células tumorales metastásicas distales. Este modelo es útil para estudiar la metástasis latentes, la inmunidad anti-tumoral, y para el diseño de nuevas inmunoterapias para tratar el cáncer de mama.

Inicio de la metástasis de carcinoma de mama mediante la Focalización del epitelio ductal con adenovirus Cre: Un modelo de ratón transgénico de Novela del Cáncer de Mama

El cáncer es una enfermedad compleja que se ve influenciada por el tejido que rodea al tumor, así como pro- local y anti-inflamatorias mediadores. Por lo tanto, los modelos de inyección de ortotrópicos, en lugar de los modelos subcutáneos pueden ser útiles para estudiar la progresión del cáncer de una manera que imita mejor la patología humana.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Los modelos preclínicos que evalúan la terapia adyuvante dirigida a la metástasis del cáncer de mama están ausentes. Para tratar esto, se desarrolló un modelo murino de metástasis de adenocarcinoma mamario pulmonar de novo , en el que se pueden evaluar las terapias administradas en la configuración adyuvante (resección postquirúrgica de tumores primarios) en cuanto a eficacia en el impacto de metástasis pulmonares previamente sembradas.

Procedimientos quirúrgicos y metodología para un modelo murino preclínico De Novo Metástasis del cáncer mamario

Presentamos un modelo de cáncer de mama Murino ortotópico y mastectomía radical modelo con tecnología de bioluminiscencia para cuantificar la carga del tumor para imitar la progresión del cáncer de mama humano.

Generación de un modelo Murino ortotópico de cáncer de mama metastásico y la realización de mastectomía Radical murino

Aquí, presentamos un protocolo para implantar las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de manera sencilla, menos forma invasiva y fácil de manejar, y este modelo Murino ortotópico mama cáncer con un entorno de almohadilla de grasa mamaria adecuada puede utilizarse para investigar diversos aspectos de la cáncer.

Ortotópico inyección de las células de cáncer de mama en la almohadilla de grasa mamaria de ratones

Este trabajo preestablece un protocolo avanzado para evaluar con precisión la carga del tumor mediante la detección de señales de proteína fluorescente verde y bioluminiscencia, así como la integración de la técnica de detección molecular cuantitativa.

Estudio del triple cáncer de mama negativo con el modelo de cáncer de mama ortotópico

Este artículo describe un método de trasplante para injertar células epiteliales mamarias de ratas de donantes en la almohadilla de grasa blanca interescapular de los animales receptores. Este método se puede utilizar para examinar los efectos del huésped y/o del donante en el desarrollo del epitelio mamario y elimina la necesidad de pre-clearing, extendiendo así la utilidad de esta técnica.

Trasplante de células epiteliales de rata mamaria en la almohadilla de grasa blanca interescapular

Los modelos de xenoinjerto derivado del paciente (PDX) y los modelos de ratón genéticamente modificados trasplantables recapitulan fielmente la enfermedad humana y son modelos preferidos para la investigación básica y traslacional del cáncer de mama. Aquí, se describe un método para trasplantar ortotópicamente fragmentos de tumores de mama en la almohadilla de grasa mamaria para estudiar la biología del tumor y evaluar la respuesta al fármaco.

Trasplante ortotópico de tumores de mama como modelos preclínicos para el cáncer de mama

Aprende el trasplante ortotópico de células del estroma mamario y células de carcinoma en ratones C57BL/6J. Este método permite analizar las interacciones estroma-epitelio durante el desarrollo tumoral en un contexto fisiológico.

El trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones C57BL/6J

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