Sujeción manual y de las rutas de la administración del compuesto en ratones y ratas

El objetivo general del siguiente video es familiarizar al espectador con diversas técnicas utilizadas para la contención manual y la administración de compuestos en ratones y ratas. Los ratones y las ratas pueden contenerse mediante varias técnicas con una o dos manos o con el uso de contenedores plásticos, así como mediante técnicas para la administración de compuestos, tales como vía intraperitoneal, subcutánea, intravascular e intradérmica. En este video se demuestran métodos de inyección, así como la administración por gavaje oral y vía intranasal.

Aprender a manipular animales con confianza, suavidad y seguridad es una parte importante de la investigación in vivo. Los animales siempre deben manipularse de una manera segura tanto para el animal como para el investigador. Por lo general, las personas nuevas en estos métodos pueden tener dificultades, ya que se necesita tiempo para sentirse cómodos trabajando con roedores.

Los roedores también pueden intimidar o asustar a las personas que son nuevas en el trabajo con ellos. La demostración visual de la administración de la dosis y las técnicas de contención es fundamental tanto para la administración exitosa del compuesto como para prevenir angustia o lesiones al animal y al que lo contiene. Los ratones pueden contenerse manualmente utilizando una técnica con una o dos manos.

El primer paso de cualquiera de los métodos consiste en levantar suavemente al ratón por la base de la cola y colocarlo sobre la rejilla metálica de la tapa del jaulón, o sobre una superficie rugosa similar. Para la técnica con una sola mano, coloque la base de la cola entre el tercer y el cuarto dedo mientras tira suavemente hacia atrás de la cola. Esto hará que el ratón agarre la superficie y tire hacia adelante.

A continuación, sujete firmemente al ratón por la nuca con la misma mano que sostiene la cola. Agarre con el dedo índice y el pulgar cerca de la base de la cabeza y extienda el agarre hacia la espalda incorporando los dedos medio y anular.

Asegúrese de aplicar suficiente presión sobre la piel alrededor del cuello para evitar que el ratón gire o se retuerza, pero no tanta que el animal no pueda respirar. La técnica con ambas manos es similar, excepto que mientras una mano tira suavemente de la cola, la otra mano sujeta firmemente al ratón por la nuca, con la cola en una mano y la nuca en la otra. Levante al ratón e introduzca la base de la cola entre la palma y el tercer o cuarto dedo de la mano que sostiene la nuca.

Como antes, asegúrese de que el agarre sea firme, pero que aún permita que el animal respire. El agarre del pescuezo en la rata generalmente se realiza con ambas manos. Primero, retire a la rata de su jaula y colóquela sobre una superficie rugosa.

A continuación, sujete la rata por la cola con la mano no dominante y tire hacia atrás suavemente. Sostenga firmemente la cola con una mano y acerque la otra desde la parte posterior hacia la nuca de la rata. Aplique una presión suave sobre la espalda de la rata mientras avanza hacia los omóplatos.

Y finalmente, agarrando el pescuezo entre los dedos y la palma de la mano. Las ratas pueden emitir sonidos cuando se las restringe de esta manera. Al utilizar un agarre por encima del hombro, sujete la rata por la cola con la mano dominante y tire suavemente hacia atrás.

A continuación, coloque la mano no dominante sobre la espalda de la rata acercándose por la parte trasera. Sujete a la rata alrededor del tórax con el anular, meñique y pulgar. La cabeza de la rata debe quedar entre el índice y el dedo medio.

Otro método de inmovilización es el agarre por debajo de los hombros. Sujete la cola con la mano dominante como se ha visto anteriormente y coloque la mano no dominante sobre la espalda de la rata, acercándose desde la parte trasera. A continuación, agarre la rata alrededor del tórax justo debajo de los omóplatos.

Los antebrazos de la rata deben empujarse suavemente hacia arriba con el pulgar y el índice. Los antebrazos deben cruzarse bajo el mentón de la rata, impidiendo que muerda. La rata puede sujetarse de esta manera con una sola mano si el cuerpo se estabiliza contra el manipulador.

Una pieza plástica delgada de forma cónica y flexible, llamada cono de Decapic, también puede utilizarse para inmovilizar al animal. Empuje al animal hacia adelante hasta que su nariz sobresalga por el orificio en el extremo del cono Decapic; luego, mantenga la bolsa cerrada alrededor de la cola o use una banda elástica o un sujetador de torsión para asegurar al animal en su lugar. Una vez inmovilizado, se pueden administrar inyecciones a través del material plástico. Un recipiente plástico rígido resulta útil cuando se necesita acceso a la cola.

Introduzca la rata según lo descrito por el fabricante del dispositivo. Con este tipo de sujetador, se tira suavemente de la rata hacia atrás, por la cola, para colocarla en la sujeción. Coloque el cierre en la parte frontal del dispositivo y ajústelo para limitar los movimientos del animal.

Si los animales parecen agitados, se puede utilizar la sujeción con toalla al colocarla sobre el animal; la oscuridad y la sujeción suave que proporciona la toalla pueden calmar a una rata inquieta. Coloque la toalla suavemente sobre la rata y luego sujétela cuidadosamente alrededor del cuerpo. Envuelva la toalla alrededor de la rata, asegurándose de no cubrir la nariz del animal.

Mueva la toalla de modo que quede expuesta la parte del cuerpo destinada a la inyección. Antes de realizar cualquiera de las siguientes técnicas de administración, es recomendable practicar el manejo de la jeringa. Idealmente, una mano manipulará la jeringa mientras la otra inmoviliza al animal. Las agujas se insertan mejor en el animal con el bisel hacia arriba, especialmente para inyecciones intravenosas.

Las agujas de calibre fino se dañan fácilmente al insertarse en los tapones de los viales. Utilice un calibre más grande para extraer los materiales y luego sustitúyalo por uno más pequeño para la inyección. La administración intranasal se utiliza para ciertos tipos de agentes infecciosos en estudios de alergia y asma, y en algunas investigaciones que implican los pulmones.

La administración intranasal no requiere anestesia ni cirugía, a diferencia de la instalación intratraqueal. Para la administración intranasal, se debe inmovilizar al animal como se describió anteriormente y, mediante una jeringa o pipeta, colocar una pequeña cantidad del material que se desea inhalar en las fosas nasales del animal. Observar que el material penetre en las fosas nasales y repetir según sea necesario.

Los compuestos se administran por vía intramuscular si requieren una absorción rápida y pueden administrarse en volúmenes muy pequeños. La contención para las inyecciones intramusculares puede requerir dos personas, ya que una de las patas traseras debe estar libre y estabilizada para la inyección. Introduzca la aguja perpendicularmente a la piel sobre el músculo cuádriceps o el músculo del muslo lateral del animal.

Tenga cuidado de no inyectar en la masa muscular posterior, ya que es posible dañar el nervio ciático. La administración intraperitoneal se elige cuando se debe administrar un gran volumen de compuesto y cuando es aceptable la velocidad de absorción, para aproximarla a la de la administración oral.

Para realizar una inyección intraperitoneal, sujete al animal y dirija la punta de su nariz hacia el suelo. Para exponer el abdomen, localice la línea media del animal y mentalmente divida el abdomen en cuadrantes.

Elige un sitio de inyección en los cuadrantes inferiores, especialmente en el cuadrante inferior derecho del animal. Utiliza una jeringa y una aguja de tamaño adecuado para inyectar el material en el animal. La administración subcutánea de una sustancia se utiliza cuando se desea una absorción lenta.

Los ratones y las ratas tienen una gran cantidad de piel suelta, por lo que se pueden administrar volúmenes relativamente más grandes por vía subcutánea en comparación con los humanos. Para las inyecciones subcutáneas, sujete al animal de forma suelta como se ha mostrado anteriormente. Tome la piel y levántela suavemente hacia arriba.

Formando una tienda con una jeringa y una aguja de tamaño adecuado, inserte la aguja en un ángulo de 30 a 45 grados dentro de la piel levantada e inyecte el material. Una pequeña hinchazón bajo la piel es señal de una inyección exitosa. Si los animales deben manipularse rutinariamente después de la inyección subcutánea, no utilice la nuca.

En cambio, utilice la piel de la grupa dorsal. Si los animales deben recibir múltiples inyecciones subcutáneas, alterne los sitios de inyección. La contención de los animales durante la administración intradérmica puede ser difícil y requerir el uso de sedación química. Si se utiliza un anestésico, asegúrese de que no interfiera con los objetivos de la investigación.

Al realizar una inyección intradérmica, primero retire el vello del sitio de inyección para que la piel quede claramente visible en el lugar de la inyección. Introduzca una aguja del tamaño adecuado en la piel con un ángulo de 15 a 30 grados. No introduzca la aguja muy profundamente.

Si se inserta correctamente, la inyección debería encontrar resistencia. Una pequeña bleb, que será más pálida que la piel circundante, será visible si la inyección fue exitosa. Aplique presión suave para evitar el reflujo del material.

La administración intravascular se utiliza para una amplia variedad de compuestos y es la vía óptima cuando el compuesto puede formularse adecuadamente y se desea un efecto muy rápido. Para una inyección intravascular en la vena lateral de la cola, sujete al animal en un cono para decapitación o en un sujetador de roedor de plástico. Como se ha demostrado anteriormente, sostenga la cola del animal por la punta con la mano no dominante para enderezarla y rotarla. Gire un cuarto de vuelta para colocar las venas de la cola en posición dorsal.

Identifique una de las dos venas laterales de la cola para la inyección, evitando la arteria ventral de la cola. Acérquese a la porción distal de la cola con la aguja formando un ángulo de 15 a 20 grados e inyecte el material. Una inyección exitosa hará que el material entre en la vena sin resistencia y que la vena de la cola se vuelva pálida durante toda la inyección.

Colocar la inyección más distalmente preserva una porción intacta de la vena que puede utilizarse si el primer intento no tiene éxito. La administración intragástrica o por gavaje oral solo se realiza en animales restringidos y despiertos, ya que la anestesia o la sedación aumentan el riesgo de aspiración. Los compuestos cuya seguridad se evalúa para administración oral humana a menudo se administran de esta manera. Comience seleccionando una aguja de alimentación oral de tamaño adecuado.

La longitud se determina sosteniendo al animal restringido en posición vertical y midiendo desde la comisura de la boca. La punta esférica de la aguja de alimentación debe llegar hasta la última costilla del animal; restrinja al animal de modo que su cabeza y su cuerpo estén en línea recta y vertical.

Esto endereza el esófago, lo que permite un paso más fácil de la aguja de alimentación. Inserte la punta esférica de la aguja en la boca del animal por encima de la lengua. Una vez que la aguja esté en su lugar, levante la aguja y la jeringa presionando suavemente contra el paladar, de modo que la nariz del animal quede orientada hacia el techo.

Puede ser necesario redirigir ligeramente la aguja al pasar la parte posterior de la garganta. Cualquier tensión en la aguja indica la necesidad de ajustar la posición; continúe pasando la aguja hasta alcanzar la distancia predeterminada. La aguja debe avanzar fácilmente y el animal no debe jadear ni ahogarse al administrar la sustancia.

Si hay resistencia o si el animal jadea, se ahoga o se pone azul, deténgase inmediatamente y retire la aguja. Una vez dominadas, estas técnicas le permitirán administrar dosis de forma segura tanto a ratas como a ratones y restringirlos eficazmente. Al intentar estos procedimientos, es importante recordar que un animal correctamente restringido hace que el procedimiento sea seguro tanto para el animal como para el manipulador.

No olvide que trabajar con animales en la ciencia es un privilegio y una responsabilidad. Elegir el método de contención correcto y las vías de administración adecuadas es buena ciencia y contribuye al bienestar animal.