Name: A tiempo real Técnica de Impedancia Eléctrica base para medir la invasión de monocapa de células endoteliales de las células cancerosas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Aprende a medir la invasión de células cancerosas a través de monocapas de células endoteliales usando impedancia eléctrica en tiempo real. Esta técnica cuantifica interacciones celulares que imitan procesos metastásicos in vivo.

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Este trabajo contó con el generoso apoyo de fondos de la Fundación del Cáncer Infantil (Baltimore, MD), Brandon Fundación Lee Carrington (Silver Spring, MD), DOD (W81XWH-10-1-0137) y el NIH (R01CA108641). Nos gustaría dar las gracias al Dr. Anton Wellstein y miembros de su laboratorio para compartir sus experiencias y ayudarnos a optimizar los métodos presentados.

1. Preparación <ol><li> Todos los pasos deben realizarse en condiciones estériles en una campana de cultivo de tejidos. </li><li> La estación de xCELLigence se coloca en una incubadora de 37 ° C en presencia de 5% de CO 2. </li><li> Usa las células HUVEC de paso bajo, preferiblemente no más que el paso 6. Además, asegúrese de que las células no son más del 75% de confluencia en el tiempo de la cosecha. </li><li> Las células HUVEC se cultivan en medios EGM-2 reconstituidos con kit de EGM-2 bala (Lonza Biosciences) que contiene factores de crecimiento, suplementos y 5% de suero bovino fetal. </li><li> Todos los rastros de tripsina deben ser retirados de las suspensiones de células haciendo girar las células a 200xg, lavando una vez con PBS, y resuspensión de ellos a densidades celulares indicadas. </li><li> Escudo xCELLigence E-placa de 16 con 0,1% de gelatina durante 1 hora a 37 ° C o durante la noche a 4 ° C. Lave la placa con PBS y añadir 100μL EGM-2 reconstituido medios. Realizar una lectura en blanco en el sistema para medir xCELLigence fondoimpedancia en ausencia de células. </li></ol> 2. Generación de HUVEC monocapa <ol><li> Coseche un frasco sub-confluente de células HUVEC mediante tripsinización. Resuspender las células en reconstituidas EGM-2 medio a una densidad final de x 10 5 células / ml 2.5. </li><li> A cada pocillo de un fondo calibrado E-placa que contiene 100μL EGM-2 los medios de comunicación, añadir 100μL de la suspensión de células HUVEC (10 4 células HUVEC 2,5 x). </li><li> Instale inmediatamente E-Plate en el instrumento xCELLigence. </li><li> Software xCELLigence programa para realizar lecturas de impedancia en intervalos de 10 minutos. </li><li> Deje que las células endoteliales crecen para 18-21 horas hasta que formen una monocapa, como se evidencia por un aplanamiento de índice de células (Figura 2). </li></ol> 3. La adición de las células y la normalización de datos invasor. <ol><li> Una vez que una monocapa HUVEC estable se ha formado, la cosecha células tumorales mediante tratamiento con tripsina y se resuspenden a una las casas de finalesdad de 1 x 10 5 células / ml en los medios utilizados para cultivar las células tumorales (tal como RPMI o DMEM que contiene 10% de FBS) </li><li> Lecturas de impedancia pausa en el software xCELLigence y eliminar E-Placa de la estación. </li><li> Retire EGM-2 medio por aspiración. Añadir 100μL de la suspensión de células tumorales que contiene 10 células x 1 4. En general, una proporción de células tumorales 1:2,5: células endoteliales sembradas, que funciona mejor para el ensayo. Sin embargo, la relación puede ser optimizado para las líneas celulares individuales. </li><li> Coloque la placa de E-en el sistema de xCELLigence en la incubadora y continuar lecturas de impedancia a intervalos de 10 minutos. </li><li> La invasión se puede monitorizar en tiempo real, en los próximos 6-12 horas como una caída en el índice de la célula debido a la retracción de las uniones endoteliales y la penetración por invasión de células tumorales. </li><li> Normalizar los resultados al momento de la adición de invasión de las células tumorales. El software permite la normalización xCELLigence a cualquier punto del tiempo y los resultadosse puede ver directamente en la ventana del programa. </li></ol> 4. Los resultados representativos: Un ejemplo de monocapa HUVEC invasión por las células metastásicas y no metastásico se muestra en la Figura 3. K7M2 es una línea celular de osteosarcoma metastásico. Estas células expresan altos niveles de la proteína del citoesqueleto ezrina enlazador, que representa las propiedades invasivas de esta línea celular 13,14. Cuando las células HUVEC se estimularon con células K7M2, hay una caída en la resistencia eléctrica dentro de las 6 horas. Esta caída en la resistencia eléctrica representa la invasión de la monocapa HUVEC por las células tumorales invasoras. La línea de células K12, por otra parte, expresa niveles mucho más bajos de ezrina y es por consiguiente menos metastásico 13. Desafiante la monocapa HUVEC con K12 células da como resultado una menos fuerte caída en la resistencia a medida que las células son incapaces de adherirse o invadir a través de la monocapa HUVEC (Figura 3). <imgsrc files alt='"Figura'></imgsrc> Figura 1. Diagrama esquemático de proceso de flujo de trabajo para la invasión de las células endoteliales por células tumorales. Las células HUVEC se sembraron en E-placas recubiertas de gelatina y se dejaron formar una monocapa confluente. Las células malignas se añaden una vez que se ha formado una monocapa y la invasión se monitoriza en tiempo real, como el índice de la célula cambia debido a la invasión de la monocapa endotelial. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="La figura 2"> Figura 2. Formación monocapa HUVEC. Los cambios en el índice de células como las células HUVEC se unen a y se extienden sobre electrodos de oro recubiertas de gelatina. La formación de una monocapa confluente está representado por una estabilización de índice de células después de 18 horas. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. La invasión de las células HUVEC por las células de osteosarcoma K7M2 y K12. Una fuerte disminución de la cell-índice se produce dentro de unas pocas horas de la introducción de las células altamente metastásicas K7M2. Células K12, por otro lado, son menos metastásico y son incapaces de penetrar en la monocapa endotelial tan eficientemente como las células K7M2. Esto está representado por una disminución menos pronunciada en el índice de la célula cuando la monocapa HUVEC se desafió con células K12. De control representa la impedancia de la monocapa HUVEC en ausencia de células cancerosas. Los experimentos se realizaron por triplicado.

<ol><li>Klein, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer.+The+metastasis+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer. The metastasis cascade.</a> Science. 321, 1785-1787 (2008).</li>
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<li>Ren, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+actin-cytoskeleton+linker+protein+ezrin+is+regulated+during+osteosarcoma+metastasis+by+PKC%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">The actin-cytoskeleton linker protein ezrin is regulated during osteosarcoma metastasis by PKC.</a> Oncogene. 28, 792-802 (2009).</li>
</ol>

El costo de la publicación de este manuscrito fue proporcionado amablemente por Roche Applied Science.

El ensayo de invasión de células HUVEC en tiempo real es un método simple pero potente, para la supervisión invasión. Se proporciona resultados en tiempo real, lo cual es una ventaja significativa sobre otras técnicas tradicionales que se basan en el análisis de punto final. El ensayo puede ser modificado para fármacos de ensayo, anticuerpos, ligandos y proteínas como inhibidores o estimuladores de la metástasis. El efecto de diferentes agentes en células endoteliales / cáncer de diafonía puede evaluarse también. Cuando la introducción de agentes exógenos, tales como factores de crecimiento y drogas en los medios de cultivo, es importante para asegurarse de que no afectan a la integridad de la monocapa HUVEC. La interrupción de la monocapa HUVEC se puede probar mediante la introducción del agente exógeno en ausencia de células invasoras, y asegurar que no hay ningún cambio en el índice de la célula. Por lo tanto, los controles apropiados deben ser incluidos como parte del diseño experimental. Líneas celulares diferentes demuestran diferentes curvas de células de índice, ya que forman un confmonocapa luent. La forma de la curva, así como la célula-índice máximo alcanzado, es de tipo celular específico. Células HUVEC muestran una característica transitoria aplanamiento de índice de células 4-6 horas después de la siembra, seguido por otro de estabilización en un índice mayor de células después de 16-18 horas. Por lo tanto, es importante dejar que las células forman una monocapa confluente durante al menos 18 horas antes de la adición de las células tumorales. Dado que el índice de células es dependiente sobre el medio ambiente iónico en la interfase electrodo / célula, varios factores tales como la morfología celular y la calidad de las adherencias célula-célula influyen en el índice de células, además de la zona del fondo del pozo cubierto. Por lo tanto, la disminución en el índice de células, que se produce tras la invasión de células tumorales, es una función de varios factores, que incluyen la retracción de las uniones endoteliales y la posterior invasión de células tumorales. El instrumento xCELLigence se fabrica en tres configuraciones diferentes: analizador de células en tiempo real(RTCA) SP, RTCA MP y DP RTCA. El instrumento RTCA SP tiene un 96-así placa de E-mientras que el instrumento RTCA MP con capacidad para seis de 96 pocillos E-platos simultáneamente. Esto permite la selección de alto rendimiento de fármacos y compuestos. Los experimentos descritos en este artículo se realizaron con el instrumento DP RTCA, con capacidad para tres de 16 y E-platos. Cada estación de soporte E-placa puede funcionar de forma independiente, lo que permite que varios usuarios ejecutar experimentos de forma simultánea. El instrumento DP RTCA también se puede utilizar para estudiar la migración utilizando placas de CIM. Estas son placas de 16 pocillos con cámaras superior e inferior separadas por un tereftalato de polietileno (PET) de membrana con un tamaño medio de poro de 8um. Los sensores electrónicos se encuentran en la parte inferior de la membrana porosa de la cámara superior. La cámara inferior sirve como un depósito para quimioatrayente para las células en la cámara superior. Sin embargo, una ventaja importante de la invasión de ensayo HUVEC sobre las placas de CIM es que la invasión de células tumorales en la antigua is no restringido por el tamaño de poro, como la invasión de células endoteliales depende de la diafonía entre las células tumorales y endoteliales. El ensayo de invasión de células HUVEC también se puede realizar en ECIS Z instrumento, fabricado por Applied Biofísica (Troy, NY). El Z instrumento ECIS utiliza una tecnología similar a la del instrumento xCELLigence, con las diferencias en las configuraciones de matriz y el electrodo. Hemos llevado a cabo con éxito los ensayos de invasión HUVEC utilizando los arrays ECIS 8 pocillos. Es importante tener en cuenta que el área de superficie de pocillos de fondo es mayor en las matrices de ECIS, lo que requiere un mayor número de células endoteliales y tumorales a ser chapado: 2,5 x 10 5 células y 1 x 10 5 respectivamente.

<table><tbody><tr><td>Estación xCELLigence RTCA DP</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469759001</td><td></td></tr><tr><td>Unidad de control RTCA</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05454417001</td><td>Portátil con software RTCA previamente instalado</td></tr><tr><td>Placa E-16</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469830001</td><td></td></tr><tr><td>Células HUVEC</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-2517</td><td></td></tr><tr><td>Medio EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>Kit complementario EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina al 0,1 % en H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O estéril</td><td>EMD Millipore</td><td>MCPROTO045</td><td></td></tr></tbody></table>

a tiempo real técnica de impedancia eléctrica base para medir la invasión de monocapa de células endoteliales de las células cancerosas

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

La diseminación metastásica de las células malignas requiere la degradación de la membrana basal, la unión de células tumorales al endotelio vascular, la retracción de las uniones endoteliales y, finalmente, la invasión y la migración de las células tumorales a través de la capa endotelial para entrar en el torrente sanguíneo como un medio de transporte a sitios distantes en el huésped 1-3. Una vez en el sistema circulatorio, las células cancerosas se adhieren a las paredes capilares y extravasación al tejido circundante para formar tumores metastásicos 4,5. Los diversos componentes de interacción célula-célula endotelial del tumor pueden replicarse in vitro por impugnar una monocapa de células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC) con células de cáncer. Los estudios realizados con electrones y microscopía de contraste de fase sugieren que la secuencia en vitro de eventos bastante representan el vivo proceso metastásico 6 in. A continuación, describimos una técnica basada en impedancia eléctrica que controla y cuantifica en tiempo real de los INVASiones de las células endoteliales por células tumorales malignas. Giaever y Keese descritos por primera vez una técnica para medir las fluctuaciones en la impedancia cuando una población de células de crecer en la superficie de los electrodos 7,8. El instrumento xCELLigence, fabricado por Roche, utiliza una técnica similar para medir cambios en la impedancia eléctrica como las células se adhieren y propagan en una placa de cultivo cubierto con una matriz de microelectrodos de oro que cubre aproximadamente el 80% de la superficie en el fondo de un pozo. Como las células se adhieren y propagan sobre la superficie del electrodo, que conduce a un aumento de la impedancia eléctrica 9-12. La impedancia se muestra como un parámetro denominado índice de células-adimensional, que es directamente proporcional a la superficie total de cultivo de tejidos bien que está cubierto por las células. Por lo tanto, el índice de célula puede ser usado para monitorear la adhesión celular, la difusión, la morfología y la densidad de las células. La invasión de ensayo descrito en este artículo se basa en los cambiosen la impedancia eléctrica en la interfase electrodo / célula, como una población de células malignas invadir a través de una monocapa de HUVEC (Figura 1). La interrupción de las uniones endoteliales, retracción de la monocapa endotelial y la sustitución por las células tumorales conduce a grandes cambios en la impedancia. Estos cambios se correlacionan directamente con la capacidad invasiva de las células tumorales, es decir, la invasión de células altamente agresivos conducen a grandes cambios en la impedancia celular y viceversa. Esta técnica proporciona una doble ventaja sobre los métodos existentes de la medición de la invasión, tales como cámara de Boyden y ensayos de matrigel: 1) la interacción célula-célula endotelial del tumor imita más estrechamente el proceso in vivo, y 2) se obtienen los datos en tiempo real, tiempo y es más fácilmente cuantificable, en comparación con el análisis de punto final para otros métodos.

En este artículo se describe una<em&gt; In vitro</em&gt; Técnica para las células cancerosas invasoras de vigilancia a través de una monocapa de células endoteliales. Los datos se adquiere en tiempo real como una función de los cambios en la impedancia en la superficie de los electrodos en la parte inferior así.

A tiempo real Técnica de Impedancia Eléctrica base para medir la invasión de monocapa de células endoteliales de las células cancerosas

La diseminación metastásica de células malignas requiere la degradación de la membrana basal, la adhesión de las células tumorales al endotelio vascular, la retracción de...

Este video demuestra un método para monitorear la invasión de una monocapa de células endoteliales por células cancerosas utilizando una técnica basada en impedancia eléctrica en tiempo real. Primero, se siembran células endoteliales de vena umbilical humana, denominadas VE, en placas EPL de 16 pocillos recubiertos con electrodos de oro en el fondo de los pocillos. Luego, se añaden células cancerosas para formar una monocapa confluente, las cuales se adhieren a las células VE e invaden la monocapa de VE, alterando las uniones entre las células endoteliales. A continuación, se obtienen mediciones de impedancia, que dependen del área total del fondo del pocillo cubierta por células.La magnitud de la invasión puede determinarse entonces en función de los cambios en la impedancia eléctrica. La principal ventaja de esta técnica frente a métodos existentes, como los ensayos con cámara de vacío y METROGEL, es que las interacciones entre células endoteliales y células tumorales imitan más fielmente el proceso metastásico in vivo, y los datos se obtienen en tiempo real y son más fácilmente cuantificables, a diferencia del análisis de punto final utilizado en otros métodos. Aunque este método puede proporcionar información sobre la invasión de células cancerosas.También puede aplicarse a otros sistemas, como investigar las interacciones entre células en el sistema inmunitario. Además, la fase inicial del experimento, en la que observamos el crecimiento de células UX, puede utilizarse para evaluar la proliferación celular de cualquier línea celular sin pasos adicionales de invasión, lo que demuestra que el procedimiento será útil. Rahim, estudiante de posgrado de mi laboratorio. Todos los pasos de este protocolo deben realizarse bajo condiciones estériles en una cabina de cultivo de tejidos.El sistema Xcel utilizado para este experimento se mantiene permanentemente en un incubador con 5% de dióxido de carbono a 37 grados Celsius, exclusivamente dedicado a este instrumento desde su primer uso. El instrumento debe dejarse en el incubador durante al menos 16 horas para que se equilibre con el nuevo entorno de temperatura y humedad. A continuación, prepare el Thence EPL 16 recubriéndolo con gelatina al 0,1% durante una hora a 37 grados Celsius.Una vez que la placa haya sido recubierta, lávela una vez con PBS. Luego añada 100 microlitros del medio e gm dos reconstituido para realizar una lectura en blanco. Para medir la impedancia de fondo en ausencia de células.Coloque el EPL en el sistema de agente de Excel en la computadora. Abra el software del agente de Excel haciendo clic en el icono del software RTCA en el escritorio dentro de la ventana del software. Haga clic en la pestaña de diseño y seleccione los pozos que contienen las muestras.Para programar la frecuencia de adquisición de datos en tiempo real. Haga clic en la pestaña de programación y luego haga clic en el icono de agregar un paso. Barridos indica el número de lecturas e intervalos indica el intervalo de tiempo entre lecturas. Estos valores se establecen automáticamente en uno y 1.00 minuto, respectivamente.Esto programa el sistema para realizar una lectura de fondo. Haga clic en agregar un paso e ingrese 300 en el cuadro de barridos y 10 minutos en el cuadro de intervalos. Esto programará el instrumento para realizar mediciones de impedancia durante hasta 50 horas.Para comenzar el experimento, haga clic en el icono de iniciar un paso. Se medirá la impedancia de fondo de cada pocillo después de que se haya realizado la medición de fondo. La ventana muestra el mensaje.Listo para el siguiente paso, haga clic. Siguiente paso para comenzar. En este momento, se pueden añadir células y se puede monitorear la formación de una monocapa como se describe.En la siguiente sección, las células endoteliales de vena umbilical humana o VE utilizadas aquí se cultivan en medio EGM dos reconstituido con el kit complementario EGM dos que contiene suplementos de factores de crecimiento y 5 %FBS. Las células deben mantenerse en un incubador a 37 grados Celsius en presencia de 5 %dióxido de carbono. El día del experimento, verifique la confluencia de las células HUB E bajo un microscopio; las células deben tener un número bajo de pases, preferiblemente no más de seis y menos del 75 %confluentes, para generar una monocapa uniforme. Recolecte las células mediante tripsinización. Una vez que las células se hayan desprendido del frasco, elimine todos los rastros de tripsina mediante centrifugación a 200 ×g. Tras la centrifugación, lave las células una vez con PBS.Luego, volver a suspender las células y el medio e GM dos reconstituido a una concentración de 2,5 × 10⁵ células por mililitro. Una vez que las células estén resuspendidas, retire el EPL calibrado de fondo del sistema EXOGEN y agregue 100 microlitros de la suspensión de HX a los 100 microlitros del medio E GM dos ya presentes en la placa. Coloque inmediatamente el EPL en el analizador de células del sistema Excel.Comience a adquirir lecturas de impedancia haciendo clic en el botón de inicio en la ventana del software. Permita que las células endoteliales crezcan. El sistema continuará tomando lecturas de impedancia cada 10 minutos.Las UVE muestran un aplanamiento característico transitorio del índice celular entre cuatro y seis horas después de la siembra, seguido de otra estabilización entre las 16 y 18 horas. Por lo tanto, es importante dejar que las células formen una monocapa confluente durante al menos 18 horas. Una vez formada la monocapa, es momento de añadir las células invasoras en preparación para el ensayo de invasión.Prepare las células tumorales invasoras. En este caso se utilizan células de osteosarcoma. Comience por recolectar las células mediante tripsina.Elimine todos los rastros de tripsina centrifugando las células a 200 G y lavándolas una vez con PPS. Tras el lavado, suspenda las células a una densidad final de uno por diez a la quinta células por mililitro en el medio utilizado para cultivar las células tumorales, como el medio RPMI o DMEA que contiene 10 %FBS. Pausar el experimento haciendo clic en el icono de paso de pausa en la ventana del software.Retire el EPL y aspire el medio EGM-2 del monocapa vacío. Añada 100 microlitros de la suspensión de células tumorales que contenga uno por 10 a la cuarta células. Por lo general, una proporción de uno a 2,5 células tumorales por células endoteliales funciona mejor para el ensayo.Sin embargo, la proporción puede optimizarse para líneas celulares individuales. Coloque el EPL de nuevo en el sistema de agente Excel dentro del incubador. Haga clic en el paso continuar para seguir tomando lecturas de impedancia a intervalos de 10 minutos.Monitoree la invasión en tiempo real durante las próximas seis a doce horas. Una disminución en el índice de células resultará de la retracción de las uniones endoteliales y la penetración por células tumorales invasoras. Cuando el experimento haya terminado, utilice el software exergen para normalizar los resultados respecto al momento de adición de las células tumorales invasoras.El software exergen permite la normalización a cualquier punto temporal en que las VEX fueron cultivadas en el sistema exergen, como se muestra en este video, y se añadieron células K7M2 o células K12 tras la formación de la monocapa. Como se observa aquí, se produce una disminución pronunciada del índice celular en cuestión de horas tras la introducción de las células K7M2. K7M2 es una línea celular de osteosarcoma altamente metastásica.Estas células expresan altos niveles de la proteína enlazadora del citoesqueleto ene, lo que explica las propiedades invasivas de la línea celular. Las células K 12, por otro lado, son menos metastásicas y no pueden penetrar la monocapa endotelial con la misma eficiencia que las células K seven M two. Esto se representa mediante una disminución menos pronunciada del índice celular, como se muestra aquí.El control mostrado aquí representa la impedancia de la monocapa de uvea. En ausencia de células cancerosas, los experimentos se realizaron por triplicado. Después de ver este video, debería tener una buena comprensión de cómo medir la invasión en tiempo real mediante la generación de una monocapa de células endoteliales y la exposición de la monocapa a células cancerosas.Los pasos iniciales del experimento que implican la formación de monocapas de HU XL se pueden utilizar para evaluar la proliferación celular mediante impedancia.Two.

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Investigación

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Medicina

Este video describe un ensayo de invasión utilizando una matriz de tres cámaras basada en la impedancia eléctrica. Esta técnica mide el potencial invasivo de las células cancerosas bajo la influencia de factores solubles secretados por las células estromales residentes en microambientes tumorales.

Ensayo de impedancia basado en matrices de tres cámaras: una técnica de análisis en tiempo real para evaluar el potencial invasivo de las células cancerosas mediante la medición de la impedancia eléctrica

Fuente: Mudduluru, G., et. al. Medición en tiempo real basada en impedancia de la migración e invasión de células cancerosas. J. Vis. Exp. (2020)Este video muestra un ensayo basado en impedancia para medir la invasión y migración de células de glioblastoma. Las células degradan la matriz extracelular, se mueven a través de membranas microporosas y se adhieren a los electrodos, generando impedancia. Este análisis en tiempo real refleja su potencial invasivo para aplicaciones de investigación del...

Mediciones basadas en impedancia de la invasión de células cancerosas cerebrales

Este protocolo revisa eléctrico de la célula-sustrato Impedancia de detección, un método para registrar y analizar el espectro de impedancia de las células adherentes para la cuantificación de la unión celular, la proliferación, motilidad, y las respuestas celulares a estímulos farmacológicos y tóxicos. La detección de la permeabilidad endotelial y la evaluación de los contactos célula-célula y célula-sustrato que se obtienen.

Eléctrico de la célula-sustrato Impedancia de detección para la cuantificación de la proliferación endotelial, la función de barrera, y la motilidad

El cáncer es una enfermedad letal debido a su capacidad para hacer metástasis en diferentes órganos. Determinar la capacidad de las células cancerosas para migrar e invadir bajo diversas condiciones de tratamiento es crucial para evaluar las estrategias terapéuticas. Este protocolo presenta un método para evaluar las capacidades metastásicas en tiempo real de una línea celular de cáncer de glioblastoma.

Medición en tiempo real basada en impedancia de la migración e invasión de células cancerosas

Describimos un enfoque para detectar y capturar subpoblaciones celulares invasivas en tiempo real. El diseño experimental utiliza el análisis celular en tiempo real mediante el monitoreo de los cambios en la impedancia eléctrica de las células. Se pueden capturar células invasivas de cáncer, inmunes, endoteliales o estromales en tejidos complejos y se puede evaluar el impacto de los cocultivos.

Detección y captura en tiempo real de subpoblaciones celulares invasivas a partir de cocultivos

Muchos genes regulados al alza estimulan la migración y la invasión de las células tumorales, lo que lleva a un mal pronóstico. Es fundamental determinar qué genes regulan la migración y la invasión de las células tumorales. Este protocolo presenta un método para investigar los efectos del aumento de la expresión de un gen en la migración e invasión de células tumorales en tiempo real.

Medición cuantitativa en tiempo real de la migración e invasión de células tumorales después de la transfección de ARNm sintético

Aquí demostramos la técnica de uso de biosensores basados en impedancia: ECIS y cellZscope, para medir la fuerza de la barrera endotelial cerebral. Detallamos la preparación y técnica de adición de diversos estímulos a un modelo in vitro del endotelio cerebral. Medimos, registramos y damos un análisis representativo de los hallazgos.

Medición de cambios en la integridad de la barrera endotelial cerebral con dos biosensores basados en impedancia en respuesta a células cancerosas y citocinas

Se presenta un nuevo enfoque para cuantificar la localización de las nanopartículas en los vasos sanguíneos de los tumores humanos transplantados con dinámica y en tiempo real de imágenes intravital en un modelo de embrión aviar.

Evaluación de la absorción de nanopartículas en los tumores en tiempo real utilizando intravital imagen

Una visión global de las técnicas involucradas en la generación de un modelo de ratón de cáncer oral y el control cuantitativo de la invasión del tumor dentro de la lengua a través de multi-fotón microscopio de las células marcadas se presenta. Este sistema puede servir como una plataforma útil para la evaluación molecular y la eficacia de los medicamentos de compuestos anti-invasiva.

Multi-fotón imágenes de invasión de células tumorales en un modelo de ratón ortotópico de carcinoma oral de células escamosas

Un ensayo para medir cuantitativamente el factor transformador del crecimiento (TGF)-β-inducida por invasión en geles de colágeno en 3 dimensiones se describe. Este ensayo se aprovecha de la serie MCF10A de líneas celulares, que representan diferentes etapas de desarrollo de cáncer de mama. Este método puede ser aprobada para su uso con otras líneas celulares y podrían ser utilizados para investigar otras posibles activadores o inhibidores de la invasión.

Ensayo esferoide para medir TGF-β inducida por invasión

Aprende a medir la invasión de células cancerosas a través de monocapas de células endoteliales usando impedancia eléctrica en tiempo real. Esta técnica cuantifica interacciones celulares que imitan procesos metastásicos in vivo.

A tiempo real Técnica de Impedancia Eléctrica base para medir la invasión de monocapa de células endoteliales de las células cancerosas (Video) | JoVE Journal

A tiempo real Técnica de Impedancia Eléctrica base para medir la invasión de monocapa de células endoteliales de las células cancerosas

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