La necropsia de diagnóstico y selecta colección de tejidos y muestras en ratas y ratones

El objetivo general de este procedimiento es realizar una necropsia básica de roedores. Esto se logra registrando primero información básica sobre el animal. El segundo paso del procedimiento es examinar las vísceras.

El tercer paso es recolectar muestras como órganos o ganglios linfáticos mesentéricos. En última instancia, el estado de salud de un animal se puede determinar a través de la histopatología u otras técnicas. Por lo general, las personas nuevas en la realización de una necropsia tendrán dificultades porque las anatomías de los roedores se aprendieron en el trabajo.

Estos métodos pueden ayudar a responder preguntas clave sobre la salud de los animales en una colonia de investigación. La demostración visual de estas técnicas es esencial, ya que lleva tiempo aprender la ubicación de varios tejidos y cómo identificar el tejido normal del anormal. Antes de sacrificar al animal, recopile información sobre su historial y registre sus características actuales, como la condición física, el comportamiento, el sexo, la edad, el peso, la tensión, etc.

Este registro es una edad vital para la persona que examinará los tejidos antes de sacrificar al animal. Asegúrese de que se utilice el equipo de protección personal adecuado. Prepare una disección, pinzas de tabla, tijeras, etiquetas para contenedores, fijador, medios y recipientes de recolección.

Después de sacrificar al animal, evalúe su condición corporal, verifique si hay anomalías en la piel y el pelaje, demacración y deshidratación. También busque evidencia de manipulaciones artificiales, implantes o cicatrices quirúrgicas en el animal. A continuación, utilizando un microscopio de disección, examine todos los orificios externos en detalle.

Estos incluyen los oídos, los ojos, la nariz, la boca, el ano y los genitales. Ahora, acueste al animal boca arriba sobre la tabla de disección, levante su piel con pinzas y use unas tijeras para cortar la piel desde el ano hasta la barbilla. A continuación, refleja la piel hacia los lados y corta a través de la pared abdominal y la caja torácica.

Exponga las vísceras torácicas haciendo dos cortes laterales a cada lado de la caja torácica. Corta el diafragma. A continuación, retira la caja torácica cortando la parte superior del esternón.

Ahora, examine los órganos torácicos y abdominales expuestos. Conozca cualquier cambio de color, olores inusuales, tamaño, diferencias y órganos faltantes o dislocados. Examine la consistencia de las superficies de los órganos y observe cualquier masa de tejido o bolsas llenas de líquido.

Además, observe la presencia de líquido en cualquiera de las cavidades. Continúe el examen con el tracto gastrointestinal. Examina el mesenterio en busca de ganglios linfáticos agrandados o masas de tejido.

Describa el contenido del tracto gastrointestinal y revise cuidadosamente si hay paredes engrosadas, masas o hemorragia. Para examinar el interior de los riñones, use una cuchilla para hacer una sección longitudinal del riñón izquierdo y una sección transversal del riñón derecho fuera del centro de la línea media. Revise el parénquima para ver si hay alguna anomalía.

Ahora inspeccione el sistema urogenital en los hombres. Identificar las vesículas seminales, los testículos, el epidídimo, los uréteres y las glándulas de lectura en las mujeres. Identificar el útero, los ovarios y los uréteres.

Examinar el sistema urogenital en busca de obstrucciones, bolsas de líquido, hemorragias u otras anomalías. Después de completar estos exámenes, aísle y extirpe los órganos diana para un examen más detallado. Por lo general, el corazón, el hígado, los riñones y el bazo se recogen a medida que se extirpan.

Sumergir cada órgano en un fijador o seguir los primeros pasos de un protocolo que requiera estos tejidos, como la congelación o la inmunohistoquímica para conseguir una fijación adecuada. Generalmente, los tejidos se sumergen en un conservante como 10%NBF en una proporción de 20 volúmenes de fijador por un volumen de tejido. Cuando trabaje con ratas, recoja el aspirado bronquial antes del aspirado nasal.

Comience reflejando la piel en los tejidos subcutáneos alejados de la zona cervical, exponiendo así las glándulas salivales y la musculatura cervical. A continuación, retira esos tejidos para exponer la tráquea. Realice una incisión de tres milímetros en la tráquea e inserte una pipeta cargada con un mililitro de líquido de muestreo en la luz traqueal dirigida trimestralmente.

Enjuague lentamente el líquido de muestreo a través de la tráquea y hacia los pulmones tres veces. A continuación, extraiga el líquido de muestreo y retire la pipeta de la tráquea. No todo el líquido regresará a la pipeta.

Por lo tanto, repita el proceso si se necesita más líquido. Para pruebas en ratones. Para tomar una muestra de aspirado nasal o aspirado bronquial, acceda a la UTA nasal faríngea con tijeras esterilizadas.

Cortar la articulación temporal mandibular y reflejar la mandíbula lejos del maxilar, exponiendo la aurícula faríngea nasal para recoger el aspirado nasal. Inserte una pipeta cargada con un mililitro de líquido de muestreo en la atu faríngea nasal del ratón o en la luz traqueal de la rata. La pipeta debe ser dirigida y empujada hacia adentro.

Por lo tanto, la punta entra en contacto con el paladar nasal. Una vez allí, inyecte lentamente el líquido de muestreo. A medida que el líquido ingresa a la cavidad nasal, formará meniscos en el orificio nasal y también debe ser visible a través del paladar oral translúcido.

Sin embargo, si el líquido sale por la boca, reoriente la pipeta. Una vez que esté completamente inyectado, extraiga el líquido de muestra de la cavidad nasal en la pipeta y, a continuación, retire la pipeta. Comience agarrando la tráquea con fórceps y córtela justo por encima de las pinzas.

A continuación, tire suavemente de la tráquea hacia arriba, cortando las conexiones de los tejidos hasta que se pueda extirpar todo el conjunto de tejidos torácicos. Ahora, coloque los pulmones planos sobre la superficie de trabajo y ate sin apretar un trozo de sutura o cuerda alrededor de la tráquea. No apriete el nudo o no podrá pasar la aguja a la tráquea.

Ahora, llene una jeringa con fijador e inserte la aguja en la abertura de la tráquea mientras asegura la tráquea a la aguja. Con fórceps, llene lentamente los pulmones con fijador hasta que estén completamente inflados. El volumen del fijador variará según la edad, la cepa y la salud del animal.

Si los tejidos desinflados parecerán planos, si se inflan demasiado, el líquido espumoso se filtrará del tejido una vez lleno, apriete el material de sutura o la cuerda que rodea la tráquea para evitar el reflujo del fijador fuera de los pulmones. A continuación, coloque los pulmones inflados en el fijador. Coloque el cadáver en una tabla de disección limpia en decúbito ventral y use tijeras y pinzas para quitar la piel y el músculo que recubre la pantorrilla.

A continuación, decapita el cadáver con unas tijeras pequeñas. Inserte la cuchilla inferior en el foramen magnum y corte a través de la línea media de la pantorrilla con un movimiento ascendente. Ahora, exponga el cerebro con fórceps tirando de la pantorrilla para abrirla.

Si el patólogo prefiere cortar secciones del cerebro mientras están en el cráneo, coloque inmediatamente el cráneo con el cerebro expuesto en NBF al 10%. De lo contrario, agarre la cabeza alrededor de la nariz con pinzas o dedos e invierta suavemente el cráneo para que la gravedad ayude a que el tejido se desprenda del cráneo. Cuidadosamente. Las pinzas de curva deslizantes a lo largo del borde exterior del cerebro comienzan en los lóbulos olfativos.

Continúe deslizando las pinzas a lo largo del cráneo hacia el cerebelo, mientras pellizca suavemente los nervios con las mismas pinzas. Cuando el cerebro se libera en el fijador, para localizar primero los ganglios linfáticos mesentéricos, localice la secuencia grande en forma de comunicación del intestino. Los ganglios linfáticos mesentéricos son los bultos amarillos, ovoides o esféricos de tejido en el mesenterio adyacente al ciego.

A menudo son un poco más gruesos y de textura más firme que el mesenterio y la grasa circundantes. Un endoscopio de disección puede ser útil para diferenciar tejidos al principio, pero con experiencia no será necesario. Con fórceps y tijeras, aísle los ganglios linfáticos mesentéricos y luego transfiéralos a un tubo de almacenamiento para su uso en cultivo, PCR o histopatología.

Después de completar el protocolo, lo siguiente está disponible para un patólogo o científico, un informe escrito de la condición objetiva y subjetiva en el momento de la eutanasia. Una descripción objetiva de los tejidos antes de su fijación, todos los principales órganos abdominales y torácicos en fijador, el cerebro y los ganglios linfáticos mesentéricos y muestras de aspirado nasal y bronquial. Una vez dominada, una necropsia abreviada puede durar menos de 30 minutos.

Al realizar este procedimiento, es importante recordar registrar sus observaciones de la condición del animal y sus tejidos. Después de ver este video, debe tener una buena comprensión de cómo realizar una necropsia completa con roedores, incluida la recolección de pulmones perfundidos, ganglios linfáticos mesentéricos y el cerebro.