Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 2:53 min. • April 30th, 2023
Los receptores de folato son glicoproteínas asociadas a la membrana sobreexpresadas por la mayoría de las células de cáncer de ovario. La explotación de estos receptores permite la administración dirigida de nanopartículas de diagnóstico a las células cancerosas.
Comience con una suspensión de los conjugados deseados del agente de contraste de nanopartículas con recubrimiento de ácido fólico. Agregue esta suspensión de nanopartículas en un cultivo adherente de células de cáncer de ovario. Incube el cultivo durante el período de tiempo deseado.
El ácido fólico funcionalizado a las nanopartículas ayuda a reconocer los receptores de folato expresados en las células cancerosas, promoviendo la unión selectiva de los conjugados de nanopartículas con las células. Posteriormente, la membrana plasmática se invagina, facilitando la captación celular y la acumulación de nanopartículas.
Recolectar las células cancerosas. A continuación, centrifugar para separar las células del sobrenadante que contiene las nanopartículas no unidas. Deseche el sobrenadante y vuelva a suspender las células portadoras de nanopartículas en un tampón adecuado para aplicaciones posteriores.
Primero, mezcle las nanopartículas de sulfuro de cobre cubiertas de ácido fólico en la concentración adecuada en medios RPMI nuevos. Agregue esta solución de nanopartículas a cada pocillo de la placa preparada de 24 pocillos que contiene células SKOV-3 a una concentración de 400 microgramos por mililitro. Incubar a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono durante dos horas.
Después de esto, tripsinizar las células con 0,5 mililitros de tripsina al 0,25% y EDTA. Para neutralizar la tripsina, agregue al menos 1 mililitro de medio de crecimiento completo RPMI 1640 sin ácido fólico y centrifugue las células a 123 x g durante seis minutos. Para lavar las células, retire el sobrenadante.
Vuelva a suspender las células en 2 mililitros de PBS y centrifugar a 123 x g durante seis minutos. Repita este paso de lavado dos veces para eliminar las nanopartículas no unidas.
Luego, vuelva a suspender las células con 1 a 2 mililitros de una solución Tween al 2% en PBS. Cuente las células con un hemocitómetro y azul de tripano. Diluir las células en una solución de Tween al 2% y PBS a la concentración elegida para la detección.