Aislamiento mitocondrial: una técnica para aislar mitocondrias de una muestra de tejido de cáncer de ovario humano

Las mitocondrias, los orgánulos citoplasmáticos conocidos como centrales eléctricas de la célula, experimentan cambios estructurales y funcionales drásticos durante la progresión del cáncer.

Para aislar las mitocondrias, tome tejido canceroso limpio en un plato de vidrio y píquelo en trozos pequeños. Transfiera las piezas a un tubo que contenga tampón de aislamiento mitocondrial. Homogeneizar la muestra para alterar las células y liberar su contenido, incluidos los orgánulos.

Centrifugar la mezcla a baja velocidad. Esto granula los componentes más densos como núcleos, restos de tejido y cualquier célula intacta, dejando componentes menos densos como mitocondrias, microsomas, peroxisomas y lisosomas en el sobrenadante. Recoger el sobrenadante y centrifugar a alta velocidad. Los microsomas, al ser relativamente más ligeros, permanecen en el sobrenadante, mientras que la fracción cruda que contiene mitocondrias se peletiza en la parte inferior.

Retire el sobrenadante y vuelva a suspender el gránulo en un medio de gradiente de densidad adecuado. Establezca un gradiente de densidad discontinuo colocando la fracción mitocondrial cruda dentro de diferentes medios de densidad, organizándol