Ensayo de trasplante de almohadilla de grasa ovárica: una técnica in vivo para introducir células en almohadilla de grasa ovárica en modelos de ratón

El trasplante permite la implantación de células o fragmentos de tejido en sitios específicos del cuerpo en un animal receptor. Nos ayuda a estudiar el papel del microambiente en la tumorigénesis y la metástasis.

Para comenzar, prepare un ratón hembra inmunocomprometido anestesiado en posición prona. Realizar una incisión quirúrgica en posición dorsomedial para exponer su tracto reproductivo. Localice las almohadillas de grasa ovárica situadas cerca del ovario y el oviducto. Con una aguja de punta afilada, haga una incisión perforando la mitad de la almohadilla de grasa sin comprometer el ovario.

A continuación, inyecte una suspensión fría de células experimentales mezcladas con una matriz de membrana basal adecuada en la incisión de la almohadilla de grasa. Deje que la matriz se solidifique y asegure las células en su interior. Vuelva a colocar la almohadilla de grasa ovárica en el peritoneo y suture la incisión. Deje que el mouse se recupere.

En un trasplante exitoso, la almohadilla de grasa proporciona un microambiente adecuado, lo que facilita la expansión de las células inyectadas. Revise el ratón semanalmente para observar el crecimiento de las células trasplantadas en la almohadilla de grasa ovárica.

Después de anestesiar a un ratón singénico de acuerdo con el protocolo de texto, use maquinillas número 40 para afeitar un área dos veces más grande que el área quirúrgica. Use povidona yodada seguida de etanol al 70% para realizar tres exfoliaciones quirúrgicas. A continuación, mueva al animal bajo un microscopio de disección.

Luego, con un bisturí, haga una incisión en la posición dorsomedial directamente sobre la almohadilla de grasa ovárica y exponga el tracto reproductivo. Luego, cubra el área con un paño estéril. Luego, con fórceps finos y romos, tire de la almohadilla de grasa ovárica con cuidado a través de la incisión hacia la línea media, minimizando el daño a los nervios y los vasos sanguíneos principales.

Para evitar el retraso del crecimiento de los trasplantes, la incisión de la almohadilla de grasa debe hacerse lo más precisa posible porque rasgar o perforar la almohadilla de grasa por completo causa sangrado. Se deben usar coagulantes para detener el sangrado según sea necesario.

Use una aguja biselada de calibre 28 para hacer una incisión de 2 a 4 milímetros de profundidad en la almohadilla de grasa ovárica, de 3 a 4 milímetros por encima del ovario, asegurándose de que la aguja solo pase aproximadamente a la mitad de la almohadilla de grasa. Para trasplantes celulares, llene una jeringa con una aguja de calibre 30 con 10 a 20 microlitros de la mezcla de matriz de membrana basal celular e inyéctela en la incisión de la almohadilla de grasa.

Para el trasplante de trompas uterinas, use fórceps finos para recoger la trompa uterina y colocarla en 10 a 20 microlitros de matriz de membrana basal mantenida en hielo. Luego, con una punta de filtro graduada XL de 0.1 a 10 a 20 microlitros, recoja la suspensión de la matriz de tejido y membrana basal y suéltela en la incisión de la almohadilla de grasa. Espere cinco minutos para que la matriz de la membrana basal se solidifique y vuelva a colocar el tracto reproductivo en el peritoneo.

Con dos puntos de sutura quirúrgica, cierre los músculos y use pequeños clips para heridas o suturas quirúrgicas para cerrar la piel. Después del trasplante, permita que el animal se recupere de acuerdo con el protocolo de texto.

• Syngeneic Mouse - A mouse that is genetically identical or of the same genotype.
• Anesthetization - The process of causing anesthesia, typically through drugs.
• Ovarian Fat Pad - Fatty tissue surrounding the ovaries in female mammals.
• Surgical Drape - Sterile fabric used during surgery to isolate the surgical site.
• Coagulant - A substance that encourages blood to clot, halting bleeding.

• Anesthetizing a syngeneic mouse occurs prior to surgery (e.g., dorsal fat pad).
• Shaving and surgical scrub is used for cleanliness (e.g., a1413202).
• Fine forceps are used to position the ovarian fat pad (e.g., surgical drape).
• Bleeding is stopped with coagulants when necessary (e.g., ovarian fat pad).

• [Question 1] What steps are taken when anesthetizing a syngeneic mouse?
• [Question 2] How is the ovarian fat pad exposed during surgery?
• [Question 3] What is the application of coagulants in the surgical procedure?

• The process has real-world applications in medical surgery (e.g., coagulant).
• It has an important impact within the biomedical research industry (e.g., syngeneic mouse).
• This technique can be used in studies related to female reproductive health (e.g., ovarian fat pad).
• The method is a significant advancement in transplantation surgeries (e.g., a1413202).