Ventana de huevo: un método para abrir la cáscara del huevo de gallina fertilizado para exponer la vasculatura de la membrana corioalantoidea

En un huevo de gallina fertilizado, la membrana corioalantoidea o CAM es una capa altamente vascularizada ubicada debajo de la membrana interna de la cáscara del huevo. Funciona para apoyar el desarrollo embrionario.

Para exponer un CAM completamente desarrollado, comience colocando una vela de huevos, una fuente de luz brillante, contra la cáscara del huevo para visualizar el interior del huevo. Ubique la celda de aire entre las membranas externa e interna de la cáscara del huevo y una vasculatura ramificada prominente dentro del huevo. Marque sus posiciones externamente.

En estos puntos, haga pequeños agujeros circulares en la cáscara del huevo para exponer la membrana de la cáscara blanca subyacente. Perfore suavemente la membrana expuesta en ambos lugares sin interrumpir la CAM ni causar fugas de albúmina o sangre.

Manteniendo el huevo longitudinalmente, aplique succión sobre la abertura natural de la celda de aire para extraer el aire del interior. La presión negativa resultante baja la CAM por debajo de la segunda abertura, generando una célula de aire artificial sobre la red vascular.

Delinee la celda de aire reubicada. Corte la cáscara del huevo, unos centímetros internos al contorno, sin interrumpir el límite entre la celda de aire y CAM. Retire la cáscara incisa para crear una ventana grande, exponiendo la CAM subyacente y la vasculatura. Use una película transparente para sellar la ventana de huevos viables.

En el día 7 u 8 de desarrollo, cuando la CAM se haya desarrollado por completo, apague el rotador de huevos y coloque aproximadamente de 1 a 3 huevos en la rejilla de huevos en el gabinete de bioseguridad. Con las luces apagadas, coloque una vela de huevo contra la cáscara del huevo para identificar y marcar la ubicación de la celda de aire de un huevo. Luego, mueva la vela de huevo sobre la cáscara para encontrar una red de vasos sanguíneos grande, girando el huevo según sea necesario.

Una vasculatura ideal se ramificará cerca de la mitad del huevo. Use un marcador para trazar la vasculatura que se utilizará para la implantación. Después de volver a encender la luz de la campana, use una herramienta rotativa inalámbrica equipada con una piedra de moler de carburo de silicio para perforar un pequeño orificio en la carcasa directamente sobre el centro de la celda de aire. Cuando se haya eliminado la mayor parte de la caparazón, pero con la membrana interna blanca intacta, taladre otro pequeño orificio donde se abrirá la ventana vascular como se acaba de demostrar. Cuando el segundo orificio esté listo, use una aguja de calibre 18 para perforar suavemente la membrana interna blanca sobre la celda de aire y la vasculatura, teniendo cuidado de que la membrana interna blanca, pero no la CAM, se rompa en toda el área perforada.

Con la luz de la campana apagada nuevamente, use el candelabro de huevos para verificar que la celda de aire se haya transferido desde el extremo del huevo al área sobre la vasculatura. Si es necesario, coloque un tubo de vacío insertado en un controlador de pipeta alrededor del orificio sobre la celda de aire original y aplique suavemente succión en ráfagas cortas para mover la celda de aire. Marque el contorno de la nueva ubicación de la celda de aire, aproximadamente 0,5 centímetros dentro del límite air-CAM, y fije un trozo de cinta de embalaje lo suficientemente grande como para cubrir el orificio sobre la nueva celda de aire.

Después de preparar los otros dos huevos como se acaba de demostrar, devuélvalos a la incubadora y abra los huevos adicionales para el experimento en grupos de 1 a 3 como se demostró. Cuando se hayan abierto todos los huevos, transfiera de 1 a 3 huevos con celdas de aire reubicadas a la rejilla para huevos en el gabinete de bioseguridad y use una herramienta rotativa inalámbrica equipada con una rueda de corte circular para cortar una pequeña línea sobre el límite de la celda de aire completamente a través de la celda sin interrumpir la CAM o la vasculatura. Con unas tijeras curvas, corte alrededor de la celda de aire restante para crear una ventana en la cáscara y verificar la viabilidad del embrión.

Los embriones viables mostrarán una vasculatura extensa, albúmina clara, movimiento embrionario y / o latidos cardíacos visibles. En embriones no viables, la MCA puede parecer opaca con pocos vasos presentes, si es que hay alguno, y los embriones pueden ser pequeños o ausentes sin movimiento o latidos cardíacos. Con unas pinzas Semken, saque pequeños trozos de algodón de una bola de algodón estéril y seque suavemente la superficie CAM de los embriones viables para eliminar el polvo y los residuos de la cáscara. Luego, cubra la abertura de la cáscara con un cuarto de apósito de película transparente de 6 por 7 centímetros sin tocar el CAM, y devuelva los huevos a la incubadora con la ventana abierta hacia arriba. Use un trozo de rejilla para huevos, el borde del rotador de huevos u otro elemento adecuado para apoyar los huevos que sigan rodando.