Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:26 min. • April 30th, 2023
La membrana corioalantoidea del pollo, o CAM, es una membrana altamente vascularizada que se encuentra en los huevos de ciertos vertebrados como los pollos. Esta membrana extraembrionaria recubre una membrana de cubierta no vascular y funciona como el sitio de intercambio de oxígeno gaseoso y dióxido de carbono entre el embrión y el medio ambiente.
Para generar un modelo de cáncer CAM, comience con un huevo de gallina fertilizado viable que lleve un CAM completamente desarrollado con una cáscara parcialmente abierta que exponga su vasculatura ramificada. Confirme que el CAM esté separado de la membrana de la carcasa.
Coloque un anillo antiadherente estéril sobre el punto de ramificación de un vaso sanguíneo. Con una varilla de vidrio, frote suavemente la membrana dentro del anillo para raspar su capa epitelial externa y exponer la capa mesodérmica subyacente que lleva la vasculatura. Pipetea una suspensión fría de células cancerosas mezcladas con una matriz extracelular adecuada en el anillo. El anillo restringe la dispersión celular.
Deje que la matriz se solidifique para asegurar las células en su interior. Selle la abertura de la cáscara del huevo e incube el huevo en condiciones adecuadas. La vasculatura densa dentro de la capa mesodérmica suministra oxígeno y nutrientes esenciales a las células cancerosas, proporcionando así un microambiente adecuado para su crecimiento y expansión.
Para preparar una suspensión de células cancerosas para el trasplante, recolecte las células del cultivo de células cancerosas de interés y sedimente las células por centrifugación. Aspirar el sobrenadante y resuspender mecánicamente las células en el medio residual. Coloque la suspensión celular en hielo y use una pipeta para medir el volumen de células en medio. Luego, vuelva a suspender las células a una concentración de 1 a 2 millones de células en 20 a 100 microlitros de medio, complementado con 2.7 a 4 miligramos por mililitro de matriz extracelular y cualquier factor de crecimiento u otros aditivos de interés.
Para la implantación de células cancerosas, usando un anillo antiadherente, coloque hasta 6 huevos para implantarlos en la rejilla de huevos y enrolle los bordes del apósito de película transparente hacia la ventana abierta para quitar la película de las cáscaras. Compruebe si los huevos son viables y saludables. Los huevos ideales tendrán un recipiente grande con vasos ramificados más pequeños dentro del centro del área abierta.
Con pinzas de iris curvas, coloque un anillo antiadherente estéril en el CAM sobre el vaso, idealmente sobre un punto de ramificación. Use una varilla agitadora de vidrio estéril para raspar suavemente la CAM y pipetear la suspensión de células cancerosas en el centro del anillo. Cuando se hayan entregado todas las células, selle la abertura con un cuarto de apósito de película transparente de 6 por 7 centímetros y etiquete el óvulo con una designación de implante adecuada. Luego, coloque el huevo de forma segura en la incubadora, con la abertura de la cáscara hacia arriba.