Imágenes de inmunofluorescencia de montaje completo: una técnica de fijación y tinción para evaluar organoides intactos

Los organoides prostáticos constituyen principalmente una capa externa de células epiteliales basales y capas internas de células epiteliales luminales dispuestas alrededor de una luz central.

Las imágenes de montaje completo permiten el estudio de organoides 3D intactos manteniendo su morfología y heterogeneidad. Para comenzar a teñir, trate los organoides con un fijador adecuado para bloquear sus componentes celulares en su lugar, preservándolos así. Lave la muestra para eliminar el exceso de fijadores.

Incubar con un cóctel de solución bloqueante y tinte de ADN. Las proteínas en la solución de bloqueo se unen pasivamente a sitios no específicos de las células y reducen cualquier tinción de fondo. Al mismo tiempo, el tinte de ADN tiñe los núcleos de las células.

Agregue dos conjuntos de anticuerpos primarios dirigidos a antígenos específicos expresados por las dos poblaciones de células constituyentes. Incubar con dos anticuerpos secundarios conjugados con colorantes fluorescentes diferentes que se unen a los anticuerpos primarios. Lave la muestra para eliminar cualquier anticuerpo no unido.

Sumerja los organoides teñidos secuencialmente en concentraciones crecientes de solucione