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El muestreo de una sola célula permite aislar una sola célula viva de una suspensión de células cancerosas para su posterior análisis.
Comience el aislamiento con una suspensión de células cancerosas. Transfiera el volumen deseado de esta suspensión a un portaobjetos de vidrio. Deje el portaobjetos intacto durante un tiempo para reducir el movimiento de las partículas y permitir que las células se asienten.
Ahora, transfiera el portaobjetos bajo un microscopio equipado con un micromanipulador conectado a una punta microcapilar. Este instrumento de alta precisión facilita la interacción física con las células de la muestra a nivel microscópico.
Dirija la punta microcapilar cerca de una sola célula diana. Al aplicar succión, recolecte la célula objetivo en el microcapilar. Ahora, transfiera el microcapilar directamente a un tubo que contenga el tampón de recolección deseado.
Expulse el contenido microcapilar para liberar la célula individual capturada en el tampón. Almacene la célula única viva aislada en hielo hasta su posterior análisis.
Para la micromanipulación, transfiera los 100 microlitros completos de suspensión celular a un portaobjetos de vidrio. Luego, coloque el portaobjetos de vidrio en un microscopio equipado con un micromanipulador y deje que las células se asienten durante 5 minutos. Luego, en tubos de PCR de 0,2 mililitros, pipetee 2 microlitros de mezcla maestra de lisis celular y transfiérala en hielo. Utilice el micromanipulador para recolectar una sola célula en 1 microlitro de solución salina tamponada con fosfato 1X.
Luego, transfiera la célula directamente a 2 microlitros de mezcla maestra de lisis celular. Use una microfuga de escritorio para centrifugar rápidamente las muestras a 2000 x g durante 3 segundos para recolectar el líquido en el fondo del tubo.