Muestreo de células individuales mediante microdisección por captura láser: una técnica para recolectar células objetivo de una población celular heterogénea

La microdisección por captura láser ayuda a obtener una sola célula diana a partir de una mezcla de células preparada en un portaobjetos de vidrio. Comience tomando un portaobjetos de vidrio adecuado recubierto con una membrana bioquímicamente inerte y permeable a los rayos UV en su superficie. Exponga el portaobjetos a la luz ultravioleta para que sea más hidrófilo y mejore la adherencia celular.

Ensamble el portaobjetos en un aparato de citocentrífuga. Agregue suspensión celular en el puerto del embudo del aparato. Citocentrífuga para permitir que la fuerza centrífuga se concentre y deposite una monocapa de células en un área pequeña en el portaobjetos de vidrio. Deje que la diapositiva se seque al aire.

Coloque el portaobjetos, con la muestra hacia arriba, bajo un microscopio de microdisección láser. Defina la región que rodea la celda de interés. Ahora, enfoque el rayo láser para diseccionar la región que contiene la célula diana junto con el recubrimiento de la membrana. A continuación, desenfoque el rayo láser y púlmelo para generar presión. Esta energía catapulta la región microdiseccionada hacia la tapa invertida de un tubo de recolección preensamblado que contiene un tampón colocado sobre el portaobjetos.

Recupere el tubo y cierre su tapa. Gire el tubo para llevar el tampón que contiene la celda objetivo única al fondo del tubo. Refrigere el tubo hasta un análisis adicional.

Para la microdisección con láser, citocentrifugar los 300 microlitros completos de suspensión celular en un portaobjetos recubierto de membrana a 300 x g durante 5 minutos. Luego, coloque el portaobjetos recubierto de membrana en un microscopio capaz de microdisección láser. A continuación, pipetee 4,5 microlitros de mezcla maestra de lisis celular en la tapa del tubo de PCR de 0,2 mililitros.

Coloque la tapa sobre la muestra y recolecte una sola célula mediante microdisección láser. Inmediatamente después, verifique si hay células aisladas en la tapa de PCR. Retire el tubo de PCR del microscopio de microdisección láser y ciérrelo. Recoja todo el líquido en el fondo del tubo con un giro corto.

• Microdissection - The process of extracting a single cell from a mixed cell population.
• Cytocentrifuge Technique - A method which uses centrifugal force to focus cells onto a slide.
• Target Capture - The retrieval of a specific designated cell from a slide.
• Laser Capture Microdissection Microscope - An instrument purposed to select and extract a target cell from a tissue section.
• Cytocentrifugation Meaning - The connotation of concentrating and depositing cells on a slide using centrifugal force.

• The concept of microdissection entails selecting and isolating a specific cell from a mix (e.g., target capture).
• Cytocentrifuge technique is a process employing centrifugal force to deposit cells on a slide (e.g., cytocentrifugation).
• Laser capture microdissection microscope allows for precise selection and extraction of target cells (e.g., microdissection).
• In context with the experiment, these principles are implemented to isolate a single target cell on a slide for further analysis.

• What does microdissection entail and what role does target capture play in it?
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• What is the use of a laser capture microdissection microscope in the process?

• Microdissection has practical applications in cell study and genome research (e.g., biotechnology).
• These techniques contribute to the clinical and research aspects of healthcare industry (e.g., pathology).
• Isolation of specific cells has broader implications for disease understanding and treatment (e.g., cancer research).
• Advancements in efficient cell isolation techniques drive scientific innovation in cell and genome studies.