JoVE Encyclopedia of Experiments
Investigación sobre el cáncer
0 vistas • 4:33 min • April 30th, 2023
Para generar células quimiorresistentes, comience tomando la suspensión de células de cáncer de próstata humano en un matraz de cultivo. Incubar el matraz para facilitar la adherencia celular y su división para formar una monocapa.
Complemente las células con una solución de medicamento contra el cáncer a una concentración óptima e incube. Las moléculas del fármaco ingresan a las células e inducen la apoptosis en las células sensibles.
Algunas células expresan transportadores especiales de salida de medicamentos o bombas que eliminan periódicamente los medicamentos. Este mecanismo evita la acumulación de fármacos, lo que permite que estas células resistan el efecto de los medicamentos contra el cáncer y se vuelvan quimiorresistentes.
Aspirar los medios que contienen drogas y desechos del cultivo. Complemente con medios de cultivo frescos sin medicamentos para apoyar el crecimiento de células quimiorresistentes. Deseche los medios gastados. Tripsinizar las células para separarlas del matraz de cultivo y transferirlas a un tubo.
Centrifugar el tubo para peletizar las células. Retire el sobrenadante que contiene tripsina. Vuelva a suspender las células en medios de crecimiento frescos. Cultive las células en un nuevo matraz de cultivo.
Posteriormente, repita los pasos de tratamiento farmacológico y cultivo celular para exponer las células quimiorresistentes a dosis crecientes del mismo medicamento contra el cáncer. Esta técnica examina el cultivo eliminando todas las células sensibles para generar un grupo de células supervivientes altamente quimiorresistentes.
Para comenzar este procedimiento, coloque celdas DU145 o 22Rv1 en los matraces cuadrados de 150 centímetros que contienen 20 mililitros de medio. Después de 24 horas, cuando las células estén en una confluencia de aproximadamente 70% a 80%, agregue docetaxel a 5 nanomolares.
Después de 72 horas, aspire el medio que contiene el medicamento y agregue medios nuevos sin docetaxel. Cambie el medio cada 3 a 4 días y espere de 1 a 2 semanas hasta que aparezcan clones en el matraz. Aspirar los medios. Lave cuidadosamente las células con 15 mililitros de PBS e incube con 4 mililitros de tripsina-EDTA al 0,05% durante 3 a 5 minutos a 37 grados centígrados para separar las células de la superficie del matraz. Luego, vuelva a suspender las células tripsinizadas del matraz usando 8 mililitros de medios frescos.
Agrupe las células de todos los matraces tratados y gránulas por centrifugación. Después de eso, retire el sobrenadante. Vuelva a suspender el sedimento celular en 20 mililitros de medios frescos y coloque las células en matraces cuadrados de 150 centímetros.
Después de 24 horas, cuando las células estén en una confluencia de aproximadamente 70% a 80%, agregue 5 docetaxel nanomolares nuevamente. Repita los procedimientos como se ha indicado anteriormente hasta que los clones aparezcan en el matraz. Luego, vuelva a colocar las celdas en matraces cuadrados de 150 centímetros.
Después de 24 horas, cuando las células estén en una confluencia de aproximadamente 70% a 80%, trátelas con docetaxel 10 nanomolar. Repita los mismos pasos de manera creciente en la dosis de docetaxel y siga agrupando los clones supervivientes después de cada tratamiento de concentración. Al final del proceso, obtendrá un conjunto de células resistentes listas para su uso experimental.