Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 3:45 min. • April 30th, 2023
La autofagia es un proceso intracelular que facilita la degradación de componentes citoplasmáticos y orgánulos no deseados dentro de compartimentos digestivos especializados llamados lisosomas. Para evaluar la autofagia, comience con un cultivo adherente de células de cáncer de próstata que expresan proteínas marcadoras autofágicas llamadas LC3 acopladas a proteínas fluorescentes verdes.
Inherentemente, las células cancerosas de próstata carecen de la enzima argininosuccinato sintasa necesaria para la síntesis de aminoácidos arginina. Por lo tanto, estas células dependen de la suplementación externa con arginina a través de medios para sobrevivir y proliferar.
A continuación, trate las células con arginina deiminasa o IDA. La IDA hidroliza la arginina libre en el medio, lo que lleva al agotamiento de la arginina. En consecuencia, las células sufren estrés metabólico, iniciando una respuesta autofágica internamente. Simultáneamente, trate las células con un tinte rojo fluorescente que etiqueta los lisosomas dentro de las células.
Durante la autofagia, las estructuras membranosas en forma de copa llamadas fagóforos se ensamblan alrededor de los componentes citoplasmáticos dañados. Ev
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