Extracción de proteínas y proteólisis: un método para obtener proteínas de muestras de tejido tumoral de próstata y su digestión enzimática en péptidos

Comience con una muestra de tejido tumoral de próstata. Vuelva a suspenderlo en un tampón de lisis frío para iniciar la lisis celular. Use un homogeneizador para descomponer aún más las estructuras del tejido y liberar sus componentes intracelulares. Sonicar la muestra en hielo para asegurar una lisis celular completa y cortar el ADN para evitar interferencias durante el procesamiento de péptidos. Caliente el lisado para alterar la estructura terciaria de las proteínas y desplegarlas.

Los agentes reductores en el tampón escinden los enlaces disulfuro entre los residuos de cisteína. Posteriormente, los agentes alquilantes en el tampón alquilan grupos tiol libres de cisteínas reducidas para evitar la reformación del enlace disulfuro. Los agentes desnaturalizantes adicionales en el tampón facilitan la desnaturalización controlada y el despliegue posterior de las proteínas.

Centrífuga para peletizar los restos de tejido y cualquier contaminante. Recoja el sobrenadante que contiene la mezcla de proteínas en un tubo nuevo. Agregue la enzima lisil endopeptidasa para escindir los enlaces peptídicos en las proteínas en el extremo C de los residuos de lisina, formando péptidos grandes. Ademá