Purificación de péptidos: una técnica basada en RP-HPLC para extraer péptidos de lisados de proteínas digeridas

Para aislar y purificar los péptidos, comience con una suspensión de lisado de proteínas que contenga una mezcla de péptidos digeridos.

Trate la mezcla con ácido trifluoroacético o reactivo a base de TFA. Este reactivo aniónico o cargado negativamente forma un complejo de pares de iones con residuos básicos o cargados positivamente en los péptidos, enmascarando así su carga y mejorando la hidrofobicidad peptídica.

Ahora, ensamble una columna de cromatografía líquida de alta resolución de fase inversa, o RP-HPLC, que contenga una fase estacionaria porosa a base de sílice, inmovilizada con ligandos hidrofóbicos no polares. Agregue un tampón de equilibrio compatible con péptidos a la columna para preparar la fase estacionaria antes de la aplicación de la muestra.

Ahora, cargue la muestra acidificada en la columna. Dentro de la columna, los péptidos hidrofóbicos se adsorben selectivamente a los ligandos hidrofóbicos de la fase estacionaria. Pase un tampón de lavado a través de la columna para eluir cualquier partícula no unida o no deseada.

A continuación, pase un tampón de elución orgánica menos polar, con alta hidrofobicidad, a través de la columna. Debido a su afinidad selectiva hac