Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:50 min. • April 30th, 2023
La fosforilación de residuos de aminoácidos específicos, como la tirosina, genera fosfopéptidos que desempeñan un papel fundamental en la regulación de varias vías de señalización celular. Su estudio permite identificar posibles biomarcadores para la terapia del cáncer.
Para aislar fosfopéptidos, comience con un polvo liofilizado de digestión de péptidos purificados extraídos del tejido canceroso. Vuelva a suspender el polvo en un tampón adecuado para preparar una suspensión peptídica uniforme. Mantenga un pH neutro para garantizar la estabilidad de los péptidos.
Prepare una suspensión que consista en perlas de hidrogel conjugadas con anticuerpos antifosfopéptidos específicos en el tampón deseado. Agregue la suspensión de perlas a la suspensión de péptidos. Los anticuerpos inmovilizados en las perlas reconocen y se unen a sus residuos específicos de aminoácidos fosforilados dentro de los fosfopéptidos, formando complejos.
Centrifugar la mezcla para recoger los complejos fosfopéptido-perlas en el gránulo. Retire el sobrenadante que contiene péptidos no unidos o fosfopéptidos no específicos. Agregue un tampón de elución de pH bajo adecuado a los complejos e incube. El pH bajo debilit
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