Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 2:43 min. • April 30th, 2023
La técnica de inclusión en parafina fijada en formol o FFPE permite la preservación de muestras de tejido fijas, deshidratadas y aclaradas dentro de bloques de parafina para su almacenamiento a largo plazo. El FFPE conserva las proteínas y otros componentes intracelulares vitales sin comprometer la morfología del tejido.
La desparafinación, o la eliminación de la cera de parafina que rodea el tejido incrustado, es un paso crítico antes de procesar cualquier muestra de tejido FFPE para su análisis posterior. Para comenzar la desparafinación, comience con un portaobjetos de vidrio que lleve una sección de tejido FFPE de interés sin teñir que tenga un grosor apropiado.
Sumerja la sección de tejido en un baño de xileno e incube durante el tiempo deseado. El xileno, un disolvente orgánico, disuelve la cera de parafina que se ha incrustado y penetrado en el tejido. La eliminación completa de la cera de parafina expone la muestra de tejido transparente fija y deshidratada.
Después de la desparafinación, trate la muestra con etanol absoluto. El etanol desplaza y elimina cualquier rastro de xileno de la sección de tejido. Posteriormente, sumerja el tejido en concentraciones decrecientes de etanol. El proceso rehidrata el tejido para el análisis histológico posterior.
Finalmente, deje el tobogán intacto durante el tiempo deseado. Este paso permite que el etanol y el agua se evaporen y obtengan una sección de tejido seco rehidratado.
Para comenzar, prepare 10 micrómetros de secciones sin teñir fijadas en formol e incluidas en parafina. Coloque los portaobjetos en un soporte de vidrio para portaobjetos y llénelo con xileno, asegurándose de que todo el tejido del portaobjetos esté sumergido. Deje los portaobjetos en xileno durante 15 minutos. Luego, vierta el xileno mientras sostiene los portaobjetos con una punta de pipeta para que no se caigan. Vierta más xileno al mismo nivel que antes y repita la incubación.
Vierta el xileno y llene el soporte del portaobjetos con etanol al 100%, asegurándose de que todo el tejido del portaobjetos esté completamente sumergido. Deje los portaobjetos en el etanol durante 3 minutos. Luego, reemplace el etanol con etanol fresco y déjelos incubar durante dos minutos más. Vierta el etanol y retire los portaobjetos. Colóquelos con cuidado boca arriba sobre una toalla de papel limpia y déjelos secar durante 10 minutos.